HPV、TCT与阴道镜在宫颈癌检查中的应用研究［摘要］宫颈癌是影响女性健康的重要疾病。在对女性宫颈癌的检测中，HR-HPV对各种病症的敏感度较高，但是特异性较低。与之相反，对宫颈癌用TCT检测则具有较高的特异性，但是敏感度较低。而将这两个检测方式与阴道镜一起进行联合检测，则可以大大提高筛选宫颈癌及癌前病变的正确率，并获得及早期诊断的检出率，本文即以此研究分析。［关键词］宫颈癌；HPV；TCTdoi：10.3969/j.issn.1004-7484(x).2014.03.011文章编号：1004-7484(2014)-03-1214-02［摘要］宫颈癌是影响女性健康的重要疾病。在对女性宫颈癌的检测屮，HR-HPV对各种病症的敏感度较高，但是特异性较低。与之相反，对宫颈癌用TCT检测则具有较高的特界性，但是敏感度较低。而将这两个检测方式与阴道镜一起进行联合检测，则可以大大提高筛选宫颈癌及癌前病变的正确率，并获得及早期诊断的检出率，本文即以此研究分析。［关键词］宫颈癌；HPV；TCTdoi：10.3969/j.issn.1004-7484(x).2014.03.011文章编号:1004-7484(2014)-03-1214-02细胞项目：见鳞状细胞、见宫颈内膜细胞、未见化生细胞。微生物项目：未见念珠菌、未见滴虫、未见放线菌。病毒项FI：未见疱疹病毒感染、未见乳头瘤病毒感染。总体分类：正常细胞涂片中度炎症。样本质量满意度：满意。炎症细胞的覆盖比例：50%-70%。2.1.2裂解与杂交用HPV裂解液对生物样品中的HPV进行裂解，分离提取核酸；用SEQIDNO.1-SEQIDNO.4特异性引物从上述步骤所得核酸中扩增IIPVL1核酸片段;对获得的HPVL1核酸片段进行焦磷酸测序反应,焦磷酸测序引物选自SEQIDNO.5-SEQIDNO.3任意一种或几种；将焦磷酸测序读出的序列与HPV型别序列进行比对，判断HPV分型结果。本发明利用DNA条码技术和焦磷酸测序技术，对生物样木中的HPV进行检测、分型，可用于评估生殖道癌症及相关疾病的发生发展并对其进行预后指导。2.1.3捕获①标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中,用PBS离心(3000g,lOmin)洗涤2次,沉积细胞重悬丁lmlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提DNA。②标木核酸的捕获：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl,pII7.4,lOmmol/LEDTA,150mmol/LNaCl,0.4%SDS,1.Omg/ml蛋白酶K)37°C下处理过夜，且等体积酚/氯仿(1：1),氯仿/异戊醇(24：1)各抽提2次；加1/10体积3mol/LNaAc(pH5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20°C2h或过夜沉淀DNA；加1体积乙醇洗涤1次；用60u1含RNA酶(100ug/ml)的TE液(10mmol/LTris-HCl,pH8.0,1.Ommol/LEDTA)溶解DNA,37°C温育30mino2.2TCT液基细胞学检测引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L）,每区含一系列开放读码框架（ORF）o序列分析表明,各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列oManos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09,该引物与HPV6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型HPV。2.3阴道镜病理活检临床上，宫颈癌是女性常见的一种恶性肿瘤，由于危害甚大，因而及早检查是非常有必要的，对于这一宫颈癌的检查项目，阴道镜可用于发现子宫颈部与癌有关的异型上皮、异型血管以及早期癌变的所在，以便准确地选择可疑部位作活组织检查。此外，阴道镜检查作为一种非损伤性及乂可重复性的检查宫颈癌变的方法，可用于已婚或未婚而有性生活史的病人，它能迅速识别肉眼看不见的宫颈管病变，及时发现宫颈炎性病变及宫颈癌前病变或宫颈癌变，能直视下选择性地定位取活检，改变以往靠主观取活检的习惯，大大的提高活检的阳性率，据临床资料显示，对于这一宫颈癌的检查项目而言，阴道镜检查宫颈癌变阳性检出率100.00%o这对于宫颈癌的早期诊断是非常有帮助的。另外，必须值得一提的是，存在宫颈糜烂而有诱发宫颈癌的可能的患者，完全有必要做阴道镜检查，因为阴道镜检查也能够及早发现宫颈癌早期隐患。3讨论3.1HPV与宫颈疾病过去一直沿用的5级程度分类已经过时了，目前,最新的医学分类标准为3级［4］：CIN1-轻度非典型增生（病变占据了不到上皮细胞的1/3）。CIN2-中度非典型增生（病变占据...