新疆额尔齐斯河流域冷水鱼肠道耐冷乳酸菌遗传分析及生理特征鉴定摘要：目的：从新疆额尔齐斯河流域冷水鱼肠道中筛选耐冷乳酸菌，研究其遗传多样性，为低温保藏及其它技术研究提供优良菌株。方法：利用MRS、M17、LSA、ELLIKER、CQ五种培养基从8种冷水鱼肠道内分离筛选出耐冷菌株，鉴定菌株表型特征并对其理化性质进行测定。建立16S基因系统发育树探究菌株进化关系，在16S系统发育关系的基础上再进行repPCR实验，使用引物为（GTG）5。结果：分离得到90株耐冷菌，最终确定有25株为耐低温乳酸菌，菌株的最适生长温度在28-32℃之间。系统发育分析结果表明：25株耐低温乳酸菌隶属于3个属，其中肠球属（Enterococcus）9株，乳杆属（Lactobacillus）15株，明串珠属（Leuconostoc）1株。结论：新疆额尔齐斯河流域冷水鱼肠道中分离的耐冷乳酸菌主要归为三个属，分离种属单一，需要进一步从冷水鱼肠道中大量分离采集菌株，继续探索研究其物种多样性和遗传多样性。Abstract：Objective：Thepurposeofthisstudywastoselectcold-adaptedlacticacidbacteria（LAB）fromtheintestinaltractofcold-waterfishesfromtheEerqisiriver，Xinjiang.Thegeneticdiversityoflacticacidbacteriawasstudied，whichprovidedtheexcellentspeciesforlowtemperaturepreservationandtechnologyresearch.Methods：ByusingculturemediumMRS，M17，LSA，ELLIKERandCQ，isolationoflacticacidbacteria（LAB）from8intestinaltractofcold-waterfisheswascarriedout.Taxonomicidentityandgeneticdiversityofstrainsisolatedweredeterminedbypartial16SrRNAgenesequencesandrep-PCRwithprimersnamed（GTG）5.Results：Atotalof90psychrotrophicisolateswereobtained.Amongthem，25isolateshadcharacteristicsofLABandshowedtheoptimalgrowthtemperaturerangingfrom28to32℃.Thephylogenesisresultshowedthat25strainsbelongedto3Genuses，Lactococcus（15strains），Enterococcus（9strains），Leuconostoc（1strains）.Conclusion：Thecold-adaptedLABfromtheintestinaltractofcold-waterfishesfromtheEerqisiriverintheAlataiXinjiangmainlygroupedintothreeGenuses.Wewillcontinuetoexploreandstudythespeciesdiversityandgeneticdiversityofpsychrotrophiclacticacidbacteria.关键词：耐冷乳酸菌；冷水鱼肠道；系统发育；rep-PCR；新疆Keywords：lacticacidbacteria；intestinaltractofcold-waterfishes；phylogeny；rep-PCR；Xinjiang中图分类号：TS254.1文献标识码：A文章编号：1006-4311（2016）16-0168-060引言乳酸菌大量存在于自然界中，可以从许多环境中分离[1]。近年来随着人们对食品安全以及食品风味多样化的要求逐渐提升，我们在食品药品等诸多领域都使用了更加健康环保且安全的生物添加剂。乳酸菌种类众多，生存环境也大相径庭，利用多种实验方法可以从许多环境中分离，所以其适应的生长温度也有差异，而其中能生长在低温环境下的乳酸菌因其生长环境温度较低被称为耐冷乳酸菌。随着人们对耐冷乳酸菌的深入研究，其功能优势逐渐体现，被应用于更多领域当中。耐冷乳酸菌主要利用乳酸菌的保鲜、抑菌和益生功能在低温环境下的特殊应用。1887年，Forster首次在冷藏状态下的鱼类体内发现并筛选出了能在0℃环境中生长的耐冷细菌。耐冷菌能生长在低温的环境中，其生理机制异于常温细菌同时能够分泌独特的代谢产物[2]。按照Morita的理论，耐冷菌是一种最适生长温度高于15℃，而最高生长温度高于20℃，同时也能生长繁殖于0～5℃的微生物[3]。狭义定义下耐冷菌只能生长在40℃以下的环境，而广义定义下耐冷菌可以生长于超过40℃的环境下[4]。由于我国生物技术发展相对滞后，近十几年才开始将微生物资源应用于食品医药领域，所以相关的研究相对稀少。而国外在生物技术方面的研究领先中国，主要将乳酸菌应用于低温冷藏肉类、鱼类、腌制泡菜等一些发酵产品中，此类的研究报道相对较多。Brillet从水产品体内筛选出三株乳酸菌，将其培养后的菌悬液涂至于无氧包装的烟熏鲑鱼产品，在4℃条件下冷藏9天，又在8℃条件下储藏19天后，...