食品安全国家标准食品中低聚半乳糖的测定1范围本标准规定了离子色谱法测定食品中低聚半乳糖的方法。本标准适用于婴幼儿食品、乳制品、焙烤食品、糖果、饮料、醋、糖浆、糖粉等食品中低聚半乳糖的测定。不适用于产品中乳糖含量与低聚半乳糖含量比值大于6的产品。2原理样品用磷酸盐缓冲液提取，用β-半乳糖苷酶水解。采用离子色谱分别测定初始提取溶液和酶解后的提取溶液中的乳糖和半乳糖。用酶解后的半乳糖含量减去酶解前的半乳糖含量和乳糖酶解产生的半乳糖含量，计算出样品中低聚半乳糖的含量。3试剂和材料3.1试剂注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1.1α-淀粉酶：酶活力≥1.5U/mg。3.1.2β-半乳糖苷酶：于米曲霉，酶活力≥8U/mg。3.1.3磷酸二氢钾（KH2PO4）。3.1.4磷酸氢二钾三水合物（K2HPO4·3H2O）。3.1.5氢氧化钠：色谱纯。3.1.6无水醋酸钠（CH3COONa）：色谱纯。3.1.7乙醇（C2H5OH）。3.1.8乙腈（C2H3N）。3.2试剂配制3.2.1磷酸盐缓冲溶液（0.2mol/LpH6.0）：称取22.0g磷酸二氢钾和6.0g磷酸氢二钾三水合物，加水溶解并稀释至1L。120℃高压灭菌器中灭菌30min。3.2.2β-半乳糖苷酶溶液（500U/mL）：称取活性约为5000U的β-半乳糖苷酶溶于10mL磷酸盐缓冲溶液中，制成最终活性为500U/mL的β-半乳糖苷酶溶液，用时现配。3.2.3乙醇溶液（50%，V/V）：量取500mL乙醇加水稀释至1L。3.2.4乙腈溶液（20%，V/V）：量取200mL乙腈加水稀释至1L。3.2.5氢氧化钠溶液（50%）：称取100g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100mL。涡旋混合均匀，静置至碳酸钠沉淀，上层液体澄清待用（约需10天），不用时密封。或市售相当试剂。3.3标准物质3.3.1半乳糖标准物质（C6H12O6）：纯度≥98%。3.3.2无水乳糖标准物质（C12H22O11）：纯度≥98%。3.4标准溶液配制3.4.1半乳糖贮备液（1.0mg/mL）：准确称取适量半乳糖标准物质，用水溶解，配制1.0mg/mL的半乳糖贮备液，保存于4℃冰箱，可使用1个月。3.4.2乳糖贮备液（1.0mg/mL）：准确称取适量乳糖标准物质，用水溶解，配制1.0mg/mL的乳糖贮备液，保存于4℃冰箱，可使用1个月。3.4.3标准曲线工作液：分别取适量半乳糖和乳糖贮备液，用水逐级稀释成浓度为1µg/mL、5µg/mL、10µg/mL、20µg/mL、25µg/mL半乳糖和乳糖混合标准曲线工作液，用时现配。4仪器和设备4.1离子色谱仪：配有三元及以上梯度泵，脉冲安培检测器，金工作电极。4.2天平：感量为0.1mg和0.01g。4.3pH计：精度为0.02pH单位。4.4涡旋混合器。4.5水浴振荡器：40℃~100℃。4.6粉碎机4.7离心机：转速≥5000r/min。5分析步骤5.1试样制备5.1.1试样预处理5.1.1.1块状或颗粒状样品：取有代表性的样品至少200g，用粉碎机粉碎，置于密闭的容器内。5.1.1.2粉末状、糊状或液体样品：取有代表性的样品至少200g，充分混匀，置于密闭的容器内。5.1.2试样提取5.1.2.1婴幼儿食品、焙烤食品、乳粉：称取均匀样品5g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，加入0.5gα-淀粉酶，加入40mL水溶解，混匀。在60℃±5℃水浴中持续振摇30min，冷却至室温后用水定容至50mL，必要时加入1滴~3滴乙醇消泡。5.1.2.2液态奶：称取均匀样品25g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，加入20mL水溶解，混匀。在60℃±5℃水浴中持续振摇30min，冷却至室温后用水定容至50mL，必要时加入1滴~3滴乙醇消泡。5.1.2.3饮料、醋、糖果：称取均匀样品2.5g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，加入20mL水溶解，混匀，用水定容至50mL。5.1.2.4糖浆、糖粉：称取均匀样品0.5g（精确到0.01g）于50mL刻度离心管中，加入20mL水溶解，混匀，用水定容至50mL。5.1.3提取液酶解5.1.3.1移取5.0mL试样溶液（5.1.2）于50mL容量瓶中，用磷酸盐缓冲溶液定容至50mL，备用。5.1.3.2移取提取液（5.1.3.1）5.0mL于10mL刻度离心管中，加入0.5mLβ-半乳糖苷酶溶液，混匀，在60℃±5℃水浴中持续振摇60min，冷却至室温后用20%乙腈定容至10mL。溶液摇匀，10000r/min离心10min，上层水相用滤纸过滤，滤液按附录A中样品中低聚半乳糖含量范围稀释因子的指导值用水稀释，稀释液用0.22µm滤膜过滤，用于测定酶解后半乳糖的浓度（C1）。5.1.3.3...