高效液相色谱法测定梔子根中齐墩果酸3-乙酸酯含量摘要：目的建立高效液相色谱法测定梔子根中齐墩果酸3-乙酸酯含量的方法。方法样品采用不同种类、不同浓度、不同时间的酸水解，将梔子根中齐墩果酸3-乙酸酯水解成齐墩果酸后，用二氯甲烷萃取、蒸干、甲醇定容，制备供试液，再采用高效液相色谱法测定其含量。结果样品的甲醇提取液加盐酸2mL,加热回流4h,水解较好。齐墩果酸3-乙酸酯在1.1025〜11.025?g范围内线性关系良好,r=0.9998,平均回收率为96.00%(RSD二1.34%)。结论本方法操作简便，重复性好，专属性强，可用于梔子根的质量控制。关键词：梔子根；齐墩果酸3-乙酸酯；含量测定；高效液相色谱法D0I：10.3969/j.issn.1005-5304.2012.11.020：R284.1文献标识码：A:1005-5304(2012)11-0051-03梔子根为茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥根及根茎，主产于湖南、浙江、四川、江西、重庆、湖北等省。梔子根具有清热解毒、凉血之功效［1］。民间主要用于黄疸性肝炎、肾炎水肿、感冒高热、出血吐血等病症的治疗，在《福建民间草药》中称作为梔子花根［2］。梔子根是治疗丙型肝炎的中药新药——松梔丸方中的君药，主含齐墩果酸3-乙酸酯。因齐墩果酸3-乙酸酯无对照品，不能直接测定其含量，为控制梔子根的内在质量，本试验建立将梔子根中齐墩果酸3-乙酸酯水解为齐墩果酸后，再用高效液相色谱仪测定齐墩果酸基金项目：国家重大科技专项（2005AA2Z3E40）；长沙市科技计划重点项目（K0803003-31）通讯作者：李红，Tel:13973193967,E-mail:hgy_li@163.com含量的方法，为寻求梔子根最佳药材资源奠定基础，为确保松梔丸质量提供试验数据。1仪器与试药LC-1OAT型高效液相色谱仪（包括岛津LC-1OATvp泵,SPD-1OAvp紫外检测器，LC-工作站）,DK-98-II型电热恒温水浴锅（天津泰斯特仪器有限公司），WGLL-125BE型电热鼓风干燥箱（天津泰斯特仪器有限公司），TU1810型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司），AB135-S型电子天平（0.01mg,METTLERTOLEDO）,KL-UP-III-20型艾柯超纯水机（成都唐氏康宁科技发展有限公司）。齐墩果酸对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号110709-200505）；甲醇（色谱纯，湖南汇虹试剂有限公司，批号20100727）,其他试剂均为分析纯，水为自制超纯水。梔子根来自湖南醴陵，经湖南中医药大学药用植物资源教研室周日宝教授鉴定为茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥根。2方法与结果2.1色谱条件固定相为WondaSilTMC18键合硅胶柱（4.6mmX250mm,5?m）,流动相为甲醇-0.4%冰乙酸（81：19）,流速为1mL/min,柱温为30°C,检测波长为210nmo2.2对照品溶液的制备精密称取齐墩果酸对照品12.62mg,置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液，浓度为0.5048mg/mLo2.3供试品溶液制备方法的优选2.3.1不同提取溶媒的比较取本品粉末（过三号筛）约1g4份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，一份精密加入乙醇50mL,另一份精密加入甲醇50mL,称定重量，加热回流lh,放冷，再称定质量,分别用乙醇和甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液25mL,加盐酸2mL,分别加热回流水解1h,水解液加水20mL,置80°C水浴挥去乙醇（甲醇），至约20mL,用二氯甲烷提取3次，每次20mL,合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，分别转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。精密吸取上述样品溶液20?L,注入高效液相色谱仪中，测定齐墩果酸峰面积，平行3次。结果，乙醇为溶媒时的平均含量为0.0754%,甲醇为溶媒时的平均含量为0.1506%o甲醇优于乙醇，故选用甲醇提取样品中齐墩果酸3-乙酸酯。2.3.2不同酸水解的比较取本品粉末（过三号筛）约1g4份（每2份作为一个平行样），精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL,称定质量，加热回流1h,放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液25mL,一份滤液加盐酸2mL,另一份加硫酸2.6mL,分别加热回流水解1h,水解液加水20mL,置80°C水浴挥去甲醇至约20mL,用二氯甲烷提取3次，每次20mL,合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，分别转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，即得。...