姜黄素类似物EF24对胆管癌细胞作用的研究#尹大龙，梁英健，郑桐森，王嘉倍，宋瑞鹏，孙博实，陆朝阳**51015（哈尔滨医科大学附属第一医院肝脏外科）摘要：探讨姜黄素糗似物EF24对胆管癌细胞盠侸疄及其可腙盠侸疄机制。昕洱：采疄CCK-8法检测EF24作用后HuCCT-1，TFK-1，HuH28胆管癌细胞细胞增值盠变化，利疄流彫细胞仪检测EF24对胆管癌细胞凋亡和周期盠影响，激光共聚焦显微镜訞察EF24作用胆管癌细胞后其徾态盠变化，蛋白印迹剢析和实时定量PCR检测相减塖因垄蛋白水平和mRNA水平盠变化。缯柸：EF24对HuCCT-1，TFK-1，HuH28胆管癌细胞增值具有明显盠抑制侸疄，并呈时间和剂量依赖悃。随着药物浓度盠增加，EF24诱导胆管癌细胞G2/M期阻滞盠比例增加，流彫细胞仪和激光共聚焦剢析显示随着药物浓度盠增加，胆管癌细胞发生凋亡盠旌睊增多，并且从早期凋亡向晚期凋亡转变。蛋白印迹缯柸表明EF24主要是下调XIAP蛋白表达，下调XIAP表达可腙发生垄转徱后水平。XIAP下调同时伴有caspase-3和caspase-9的裂解片段表达增加。缯谖：EF24具有明显抑制胆管癌细胞生长盠侸疄，可佁诱导胆管癌细胞G2/M周期阻滞，并且通过下调XIAP表达激活线粒体凋亡遰径诱导细胞凋亡。罘上，EF24有望扬亖治疗胆管癌盠候选药物。关键词：EF24；胆管癌；X-连锁凋亡抑制蛋白；凋亡：R73-320TheeffectandpotentialmechanismsofEF24oncholangiocarcinomaYinDalong,LiangYing激an,ZhengTongsen,Wang激abei,SongRuipeng,SunBoshi,LuZhaoyang25303540(DepartmentofHepaticSurgery,TheFirstAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity,Harbin,Heilong激angProvince,China,150001)Abstract:Objectives:ThisstudyfocusesontheanticancereffectandpossiblemolecularmechanismofEF24onhumancholangiocarcinomacells.Methodsandresults:EF24showedthegreatantiproliferativeandanticarcinogenesispropertiesonHuCCT-1,TFK-1andHuH28threehumanCCAcelllinesintime-anddose-dependentmannerbyCellCountingKit-8assay.Thecompoundinhibitedcellproliferation,inducedcancercellsapoptosisandG2/Mphasearrest.FlowcytometeranalysisandconfocallaserscanningmicroscopescanshowedthatEF24inducedCCAcellearlyapoptosisin2μmol/Landlateapoptosisin4μmol/L,whichcausedbydown-regulatingposttranscriptionallytheXIAPlevels.Consequently,westernblottinganalysisshowedthatinhibitionofXIAPactivatedcaspase-9,caspase-3caspase-7andPARP,whereascaspase-8expressionwasnotaffectedbyEF24treatment.Atthesametime,cellcycleanalysisshowedthattherewereanincreasednumberofcellsintheG2/Mphase.Conclusions:Takentogether,thesedatademonstratesthatthenovelcurcumin-relatedcompoundEF24isapotentantitumoragentagainstCCAbyinducingcaspase-mediatedapoptosisfollowedbyinhibitingXIAPexpressioninpost-transcriptionallevels,whichsuggestEF24maybeasignificanttherapeuticpotentialcandidateforCCAcancers.Keywords:EF24;Cholangiocarcinoma;XIAP;Apoptosis基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金(20132307120036,20102307120008)作者简介：尹大龙(1979-4-8),男,主治医师,主要研究方向:胆管肿瘤机制及治疗方面研究通信联系人：陆朝阳(1973-04-29),男,副教授,研究方向:肝胆肿瘤机制及治疗方面研究.激nyuchen1975@yahoo-1-0引言45EF24是Adams[1]等根据姜黄素的分子结构合成的姜黄素类似物，研究显示包括对乳腺癌，卵巢癌，及一些腹部实体肿瘤如胃癌、肠癌、肝癌和前列腺癌，都显示了很好的抑制作用，其抑制效果是姜黄素的10倍左右，并且其在体内实验中对机体的毒副作用很小[2]。然而其在胆管癌中的作用及其机制尚无报道，本文通过多种方法观察EF24对胆管癌是否具有抑制作用并探讨及其可能的作用机制。501、材料与方法1.1细胞培养：TFK-1，HuCCT-1，HuH28人胆管癌细胞系由日本东北大学医学部外科惠赠。在含10%胎牛血清和青链霉素双抗的RPMI-1640（TFK-1，HuCCT-1）或α-MEM（HuH28）培养基中进556065707580行培养。在5%二氧化碳37...