免疫学专业优秀论文促凋亡基因PDCD5在人胶质瘤中的表达及其对化疗敏感性的影响关键词：脑胶质瘤PDCD5基因促凋亡基因化疗敏感性顺铂基因表达摘要：目的:脑胶质瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤之一，发生率约占所有颅内肿瘤的35.12-61.10％，具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低等“三高一低”的特点。目前临床治疗胶质瘤的方法主要是手术治疗、放疗、化疗，近几十年来，尽管新的诊疗技术不断出现，但由于大多数胶质瘤呈浸润性生长，与脑组织无明显分界，手术即使达到显微镜下和影像学全切除，复发还是在所难免，病人的总体生存率没有明显提高。胶质瘤术后化疗是胶质瘤综合治疗中的一个重要环节，特别是对进一步杀灭残留肿瘤细胞，防止肿瘤复发和延长患者生存时间起着十分重要的作用。然而，临床上相当一部分病人常规化疗疗效欠佳，过去认为是由于受血脑屏障的影响，化疗药物难以到达肿瘤细胞。近年来研究发现，影响脑胶质瘤化疗效果有多方面的原因，其中化疗药物产生耐药性是化疗失败的重要原因之一。而如何提高化疗药物的敏感性则成为胶质瘤治疗的瓶颈。随着分子生物学研究的深入，为神经胶质瘤的基因研究方面提供了广阔的前景，而寻找影响化疗敏感性的基因，对于胶质瘤的治疗具有重要价值。PDCD5是近年来发现的新基因，在凋亡诱导因素存在下能够明显促进细胞凋亡的发生，研究结果显示卵巢癌、胃癌、肾透明细胞癌等肿瘤中PDCD5表达下调，那么PDCD5在入神经胶质瘤组织中的表达状况如何？PDCD5在神经胶质瘤进展中是否发挥作用？能否影响胶质瘤的化疗敏感性并成为胶质瘤基因治疗的靶点之一？尚不清楚。为了明确PDCD5基因与入神经胶质瘤发生、发展的关系，为进一步以此为靶点进行基因治疗提供实验依据，本论文从以下几个方面进行了探讨：1.PDCD5在入神经胶质瘤中的表达状态及其临床意义2.PDCD5表达对胶质瘤细胞生长及化疗敏感性的影响3.PDCD5影响胶质瘤细胞化疗敏感性的分子机制4.PDCD5与凋亡相关基因（如PDCD4）的关系方法:一、PDCD5在入神经胶质瘤组织中的表达及其临床意义1.病例收集：收集山东大学齐鲁医院神经外科2003～2006年神经胶质瘤患者的新鲜标本共30例包括其中3例患者的相应癌旁组织，以及石蜡包埋的肿瘤标本58例。所有患者术前均未接受任何放、化疗治疗。2.分别用RT-PCR及Westernblot方法检测神经胶质瘤细胞系U251、U87及神经胶质瘤组织中PDCD5mRNA及蛋白质的表达。3.X2检验分析PDCD5在不同胶质瘤病例中的表达与胶质瘤临床病理生理学特征之间的关系，Kaplan-Meier生存曲线分析PDCD5的表达与胶质瘤患者生存率之间的关系。二、PDCD5过表达或沉默表达对胶质瘤细胞系生长及化疗敏感性的影响1.用空载体或PDCD5重组表达载体转染胶质瘤细胞系，应用RT-PCR及Westernblot及免疫细胞化学方法检测转染后PDCD5的表达，建立低表达及高表达PDCD5的胶质瘤细胞模型。2.倒置显微镜观察转染PDCD5后神经胶质瘤细胞系形态、生长分化的变化，绘制生长曲线。3.采用不同的化疗药（顺铂等），设定不同浓度，用MTT法检测稳定转染空载体或PDCD5的胶质瘤细胞系生存率变化。4.克隆形成实验观察PDCD5转染后胶质瘤细胞系在长期低浓度化疗药处理时细胞集落形成的情况。5.设计合成PDCD5特异的siRNA（HPLC纯度>95％），应用siRNA沉默胶质瘤细胞系中PDCD5的表达，转染48小时后在mRNA及蛋白质水平检测PDCD5的表达。6.倒置显微镜观察和活细胞计数分析siRNA沉默PDCD5的表达后神经胶质瘤细---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---胞形态、增殖的变化，绘制生长曲线。7.MTT法检测siRNA沉默PDCD5的表达后对胶质瘤细胞系化疗敏感性的影响。三、PDCD5影响胶质瘤细胞化疗敏感性的机制研究1.化疗药处理后的PDCD5及空载体稳定转染细胞系的凋亡检测：通过Hoechst染色荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化；流式细胞术分析细胞晚期凋亡率变化。2.凋亡通路蛋白检测：应用Westernblot方法检测凋亡相关蛋白caspase-3的活性变化及Bcl-2、Bax蛋白表达变化。四、PDCD5对凋亡相关基因PDCD4的影响结果:一、PDCD5在入神经胶质瘤中的表达及其临床意义二、外源性PDCD5的过表达对...