营养与食品卫生学专业优秀论文三羟异黄酮对HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞辐射敏感性的影响及其机理研究关键词：三羟异黄酮放射治疗乳腺癌细胞辐射敏感性蛋白酪氨酸激酶丝裂原活化蛋白激酶erbB-2基因摘要：乳腺癌是女性的常见恶性肿瘤。在许多西方国家中，乳腺癌的发病率占女性肿瘤的首位。近20年来，我国乳腺癌的发病率明显上升，成为危险女性健康的主要因素之一。放射治疗是乳腺癌治疗中的一项重要手段，提高放疗效果在临床上非常必要。在乳腺癌患者中，25～30％的患者HER-2/neu受体高表达。HER-2/neu由原癌基因erbB-2/neu表达，为表皮生长因子受体家族成员，具有PTK活性。研究发现HER-2/neu高表达乳腺癌恶性程度高，肿瘤生长速度快，易转移，对射线和化疗药物的不敏感，治疗预后差且易复发。HER-2/neu在临床上已被作为癌症抗药性和预后不良的指征之一，并成为抗肿瘤治疗的新靶点。三羟异黄酮(Genistein，又称染料木黄酮或金雀异黄素)是大豆中的一种重要非营养素成分，已有大量流行病学和实验研究表明其具有较强抗癌效应。三羟异黄酮是一种重要的天然植物雌激素，对人体无明显毒副作用，其结构与雌二醇非常相似，具有模拟和拮抗雌激素、抑制PTK活性等重要药理作用。近年来有学者对具有受体PTK活性的HER-2/neu与乳腺癌细胞辐射敏感性的关系进行了研究，发现抗HER-2/neu受体抗体可导致乳腺癌细胞生长明显受抑，降低受损DNA修复能力，增强HER-2/neu高表达乳腺癌细胞的放射敏感性；一些临床上观察发现HER-2/neu低表达者复发率低，用放疗与阻断HER-2/neu受体或抑制其PTK活性联合方法可显著降低HER-2/neu高表达乳腺癌患者的死亡率。但其详细的分子机制尚不清楚。基于以上分析，结合国内外研究进展，本研究以体外培养人乳腺癌细胞MCF-7(ER+，HER-2/neu低表达或不表达)、MDA-MB-453(ER-，HER-2/neu高表达)为研究对象，首先通过基因转染技术建立HER-2/neu高表达的MCF-7乳腺癌细胞。然后通过台盼蓝染色、MTT实验、流式细胞分析等方法，观察三羟异黄酮和γ射线对三种乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响，证明三羟异黄酮具有增加HER-2/neu高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的作用；其次通过蛋白印迹分析、RT-PCR等方法，研究三羟异黄酮对乳腺癌细胞Akt、P-Akt、p53、ERK2、HER-2、p21mRNA及蛋白表达的影响，从而阐明三羟异黄酮增强HER-2/neu高表达乳腺癌细胞辐射敏感性的分子机制主要研究结果和结论如下：1．通过质粒转染技术将pCMV/ERBB2质粒和pCIneo质粒共转染入MCF-7乳腺癌细胞，成功建立HER-2/neu稳定高表达的MCF-7细胞(命名为MCF-7/HER-2)。2．分别以(5，10，20，40，70，100，130，160，190，220，250，280，310，340μmol/L)三羟异黄酮处理MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7三种乳腺癌细胞24h，MTT检测发现三羟异黄酮对三种乳腺癌细胞的增殖能力均有影响，对MDA-MB-453细胞的增殖抑制作用随处理浓度增加而增大，呈剂量依赖关系，IC50约为100μmol/L；对MCF-7/HER-2和MCF-7细胞在低浓度表现为增殖促进作用，但在分别大于40μmol/L和10μmol/L时表现为增殖抑制作用。3．100μmol/L三羟异黄酮联合或单独10Gyγ射线处理MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7三种乳腺癌细胞24h后，流式细胞仪分析，发现与对照组相比，MDA-MB-453、MCF-7/HER-2细胞的射线组凋亡率，无显著差异(p>0．05)，而三羟异黄酮联合射线组的凋亡率分别增加32．63％％---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---(p<0．05)、47．36％(p<0．05)；MCF-7细胞射线组凋亡率，与对照组相比增加12．90％(p<0．05)，而三羟异黄酮联合射线组与射线组没有显著差异(p>0．05)。提示HER-2/neu高表达的乳腺癌细胞对射线诱导的凋亡有抵抗作用，但三羟异黄酮可增强γ射线诱导HER-2/neu高表达乳腺癌细胞MDA-MB-453细胞、MCF-7/HER-2细胞的凋亡作用。4．100μmol/L三羟异黄酮联合或单独10Gyγ射线处理MDA-MB-453、MCF-7/HER-2、MCF-7三种乳腺癌细胞24h，免疫印迹和PCR分析，发现P-Akt蛋白和mRNA表达减弱，而HER-2和Akt均没有变化在三种细胞中；在MCF-7/HER-2细胞中，p53蛋白和mRNA表达量增强；在MDA-MB-453细胞中p21蛋白...