庆大霉素发酵液的分离提取范一文1，梁伟凡1，李嘉胜1，王海滨1，范洪琼2(1．华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州510006;2．重庆三峡职业学院，重庆摘要:建立从发酵液中提取庆大霉素的方法，获得具有一定纯度的庆大霉素分析样品。采用732阳离子交换树脂，利用离子交换法从发酵液中提取庆大霉素，探讨不同条件对庆大霉素收率的影响。确定最优的提取条件为:发酵液pH2～3，吸附时间2h，解吸剂浓度5%，解吸剂流速0．4mLmin。经HPLC测定，发酵液通过离子交换法分离提取后，庆大霉素纯度由50．7%提高到92．5%。离子交换法适用于庆大霉素发酵液的分离提取，提取液纯度达到药物分析的要求。关键词:阳离子交换树脂;中图分类号:R978．1+2离子交换法;庆大霉素文献标志码:A文章编号:1006－7167(2011)08－0028－04ResearchinSeparationandPurificationofGentamicinFermentationBrothFANYi-wen1，LIANGWei-fan1，LIJia-sheng1，WANGHai-bin1，FANHong-qiong2(1．CollegeofBiologicalScienceandEngineering，SouthChinaUniversityofTechnology，Guangzhou510006，Abstract:Toestablishamethodforseparationandpurificationofgentamicinfromfermentationbrothinordertoobtaincertainpurityofgentamicinsamples．Usingion-exchangemethodwith732cationexchangeresintoseparategentamicinfromfermentationbroth．Theeffectofdifferentconditionsongentamicinrecoverywasdiscussed．Theoptimalextractionconditions:pH2－3，adsorptiontime2h，strippantconcentration5%，strippantflowrate0．4mL/min．DeterminedbyHPLC，thepurityoffermentationbrothseparatedandpurifiedwasupto92．5%．Ion-exchangemethodissuitableKeywords:cationexchangeresin;ion-exchangemethod;gentamicin中性质较稳定，亲和力较强［5］，常用的分离纯化方法主要有沉淀法、泡沫分离法、离子交换法、反胶束萃取法和膜分离法［6-7］。泡沫分离法和反胶束萃取法的庆大霉素回收率不高;沉淀法的回收率可达到100%，但得到的产物纯度不高;膜分离法集分离、浓缩、提纯于一身，具有节能、不破坏产品结构和操作简单等特点，但其经济成本高，且容易引起二次污染;离子交换法不仅产品回收率高，纯度高，而且操作简单，成本低，是目前国内外分离提取庆大霉素常用方法。本文采用732阳离子交换树脂，利用离子交换法从发酵液中提取庆大霉素［8-11］，探讨不同条件对庆大霉素收率等的影响，确定最优的分离提取参数，建立一种庆大霉素的分离方法。引言0庆大霉素是由放线菌属小单孢菌发酵产生的氨基糖苷类广谱抗生素，对多种革兰氏阴性菌(如大肠杆菌、沙门氏菌等)和金黄色葡萄球菌(包括β-内酰胺酶菌株)具有抗菌作用［1-4］，临床上广泛应用庆大霉素的分离提取一直是国内外众多学者研究的热点。庆大霉素是一种碱性、水溶性很强的抗生素在中酸性环境收稿日期:2011－02－15基金项目:华南理工大学2009年校级实验教学改革项目基金资助(Y1090230)作者简介:范一文(1968－)，女，安徽芜湖人，讲师，主要从事生物制药及药物分析实验室工作。Tel．:13719196559;E-mail:yw1027@163．com范一文，等:庆大霉素发酵液的分离提取29第8期(1)短小芽孢杆菌菌悬液制备。取短小芽孢杆菌材料和方法1斜面1支，加入2mL灭菌水，将菌苔洗下，摇匀，取1mL接种于营养琼脂培养基中，37℃培养7d。革兰氏染色法涂片镜检，应有芽孢85%以上，用20mL灭菌水将芽孢洗下，制成悬液，在65℃水浴中加热30min，即得。1．1实验材料检定菌1．1．1短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)，广东省微生物研究所提供。试剂(2)检查抑菌效果。无菌条件下向培养皿加入1．1．2发酵液由本实验室提供。庆大霉素标准品(638U/mg)(中国药品生物制品检定所提供)。732型树脂(强酸性苯乙烯型阳离子交换树脂)，711型树脂(强碱性苯乙烯型阴离子交换树脂)，抗生素检定培养基Ⅰ号，营养琼脂培养基(广东环凯微生物科技有限公司提供)。氨水，盐酸，氢氧化钠，氯化铵，硫酸，磷钨酸钠，均为分析纯。20mLⅠ号培养基，摇匀凝固，作为底层。另取Ⅰ号培养基，加适量短小芽孢杆菌孢悬液，摇匀，取5mL于上述培养皿中，在底层...