高纯度EGCG单体提取与分离纯化小试工艺研究郑琳++龚自明摘要：在筛选出合适的富含EGCG（表没食子儿茶素没食子酸酯）的茶叶原料基础上，开展提取和分离纯化试验，获得配套工艺和参数，得到高纯度EGCG单体。结果显示，浸提温度70℃，料液比1∶20（g/mL）条件下浸提60min，茶汤中EGCG含量较高；浸提液用聚酰胺树脂纯化分离，纯化的最佳工艺条件为上样流速1BV/h、料液浓度为20mg/mL、解吸流速为1BV/h，分别用1BV的水、1BV20%的乙醇溶液以及1BV80%的乙醇溶液进行梯度洗脱，两次柱层析制得的EGCG纯度为95.21%，得率仅为0.276%。该方法绿色无污染，对提高湖北省秋茶的利用率具有重要意义。关键词：EGCG；提取；分离纯化；工艺研究：S571.1：A：0439-8114（2016）24-6533-04DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.24.052EGCG（表沒食子儿茶素没食子酸酯）作为茶叶中的一种有效成分，具有抗病毒、抗氧化、抑菌消炎等功能[1]，在体内外试验中被证实具有广泛的抗癌活性，其抗癌机理包含诱导细胞凋亡、调控细胞周期、阻滞细胞转移、协同抗癌等[2]。近年来对其功效的研究日趋深入和完善，被广泛用于食品、保健品和日化领域。本研究通过对高纯度EGCG的提取、分离纯化工艺的探讨，为放大生产EGCG提供参考，对提高湖北省秋茶的利用率具有重要意义。1材料与方法1.1材料1.1.1茶叶原料茶叶原料来自湖北省农业科学院果树茶叶研究所茶叶资源圃种植的鄂茶1号、鄂茶5号、鄂茶8号、中茶108和福鼎大白。1.1.2试验试剂乙醇为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），冰醋酸、乙腈为色谱纯（美国FisherChemical）。1.2试验方法1.2.1原料筛选在前人研究基础上[3]，选择EGCG含量相对较高的茶叶资源作为试验原料。采摘一芽二叶（采摘日期为2015年8月6日），100℃纯水蒸制3min，100℃烘至足干，茶样粉碎后过40目筛，分别称取3g，加入500mL水，100℃浸提45min，得到的滤液定容至500mL，HPLC法检测其EGCG含量。1.2.2EGCG的提取单因素试验：按照茶多酚提取方法，浸提温度选取40、50、60、70、80、90、100℃，浸提时间选取30、40、50、60、70、80、90min，浸提料液比选取1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14、1∶16、1∶18、1∶20（g/mL，下同），以此研究各因素的影响作用。正交试验：通过单因素试验，分析各因素对EGCG浸出量的影响，确定较佳的单因素试验条件范围，在此基础上，以浸提温度、浸提时间、料液比为主要影响因素，各选出4个水平，安排L16（43）正交试验分析。1.2.3EGCG的分离纯化树脂的预处理：树脂在使用之前需要进行有效的预处理，以除去制备和贮存中引入的杂质。一般预处理的方法是：①乙醇浸泡。树脂浸泡在95%左右浓度的乙醇中，乙醇的液面高于树脂，不停搅拌以使树脂和乙醇充分接触，对树脂进行初步的浮选。浸泡时间一般为24h。②乙醇冲洗。浸泡后的树脂湿法上柱，再用95%的乙醇冲洗，直至流出液清亮无浑浊为止。③3%的氢氧化钠溶液的浸泡和冲洗。先将经乙醇浸泡冲洗过的树脂浸泡于3%的氢氧化钠溶液中4h，再以2BV3%的氢氧化钠溶液冲洗树脂，最后用蒸馏水冲洗至中性。④5%的柠檬酸冲洗。先将经3%的氢氧化钠溶液浸泡冲洗过的树脂浸泡于5%的柠檬酸溶液中4h，再以2BV5%的柠檬酸冲洗树脂，最后用蒸馏水冲洗至中性[4]。树脂的筛选：在刘伟等[5]、王伟涛等[6]研究基础上，选择AB-8、HPD-826和聚酰胺三种树脂。根据前期研究发现，树脂在使用3～15次时柱效稳定、分离效果较佳，故选取使用过2次的3种树脂各8g，分别置于500mL的具塞磨口烧瓶中，加入2%浓度的原茶汤400mL，在恒温摇床（30℃、140r/min）上充分吸附2h，考察树脂对EGCG的吸附量。冰箱中静置约12h后过滤，滤液中加入200mL80%的乙醇，在恒温摇床上充分解吸2h，得解吸液。将以上的原茶汤、吸附后茶汤残留液和解吸液各用移液管吸取5mL，定容至50mL，进行HPLC分析检测，并按下式分别计算吸附量和解吸率：Q=■；E=■式中，Q为吸附量（mg/g），M为去游离水的树脂质量（g），E为解吸率，V1为茶汤原始体积，V2为80%乙醇洗脱液体积，C1为原茶汤溶液浓度（mg/mL），C2为树脂吸附后剩余茶汤残留液浓度（mg/mL），C3为80%乙醇洗脱液浓度（mg/mL）。洗脱剂浓度的选择...