纯中药制剂卡宁对肝癌细胞的作用

纯中药制剂“卡宁”对肝癌细胞的作用[摘要]目的:观察抗癌中药“卡宁”对体外培养的肝癌细胞株BEL-7402细胞的凋亡抑制基因bcl-2的影响,探讨其抗肿瘤治疗的作用机制。方法:取体外培养的对数生长期BEL-7402细胞,随机分为4组:对照组,5-氟尿嘧啶组,含药“卡宁”血清1组(10%含药血清组)和含药“卡宁”血清2组(15%含药血清组);采用MTT比色法观察不同浓度含药血清对体外培养的人肝癌细胞株BEL-7402细胞的抑制能力,PCR检测其对凋亡抑制基因bcl-2的影响。结果:PCR结果显示,“卡宁”1、2组bcl-2的活性明显低于对照组(P=0.038);MTT结果显示,细胞生长抑制率随含药血清作用时间及浓度的增加而增大(P<0.05),15%含药血清72h的作用最强。结论:对肿瘤细胞bcl-2的抑制可能是抗癌中药“卡宁”诱导肿瘤细胞凋亡作用机制的一部分。[关键词]bcl-2;中草药;肝脏肿瘤[]R735.7[文献标识码]A[]1673-7210(2009)01(a)-014-03Effectofchinesemedicine"Caning"onhepaticcancercellsMAOXiao-ling,PANSu-ying,ZHANGDa-peng(TheFirstAffiliatedHospitalofGuangzhouMedicalCollege,Guangzhou510120,China)[Abstract]Objective:Toobservetheeffectsofanticancerchinesemedicine"Caning"ontheanti-apoptosisgenebcl-2ofinvitroculturedhumanhepaticcancercelllineBEL-7402cells,andinvestigatesitsanticancertherapeuticmechanism.Methods:InvitroculturedBEL-7402cellsinalogarithmicgrowthphasewererandomlydividedinto4groups:controlgroup,5-Fluorouraciltreatedgroup,serumgroup1containing"Caning"(10%pastilleserum)andserumgroup2containing"Caning"(15%pastilleserum);thenMTTassaywasemployedtodetecttheinhibitoryabilityofserumscontainingdifferentconcentrationsof"Caning"toinvitroculturedhumanhepaticcancercelllineBEL-7402cells,andPCRwasusedtodetecttheeffectof"Caning"ontheanti-apoptosisgenebcl-2.Results:Resultsofinvitroexperimentsuggestedthat,thebcl-2geneactivityinserumgroup1and2containing"Caning"wassignificantlylowerthanthatofcontrolgroup(P=0.038);resultofMTTassayindicatedthatthecellgrowthinhibitoryratewasincreasedalongwiththeincreaseoftheactiontimeandconcentrationofserumcontaining"Caning"(P<0.05),andthe15%pastilleserumshowedthestrongestinhibitoryeffectat72h.Conclusion:"Caning"couldsignificantlyinhibitthegrowthofhepaticcancercellspartlybyinhibitingtheanti-apoptosisgenebcl-2.[Keywords]bcl-2;Chinesemedicine;Hepaticcancer中药诱导细胞凋亡是中医药抗肿瘤的分子机制之一。从中医药角度阐述中药诱导肿瘤细胞凋亡的机制有助于中医肿瘤的临床和科研工作的深入。已发现许多基因与细胞凋亡有关,有凋亡抑制基因,如bcl-2;凋亡诱导基因,如p53等。肿瘤是一种基因病,与肿瘤发生相关的基因也可因阴阳分为两大类,即癌基因与抑癌基因。细胞中的癌基因或抑癌基因原本是调控正常分化的正负因素。从中医理论而言,癌基因属阳,抑癌基因属阴,“阴生阳长,阳杀阴藏”。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株肝癌细胞株(BEL-7402)由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供。1.1.2药物5-氟尿嘧啶(5-FU,天津市氨基酸公司人民制药厂生产,批号:951102),用灭菌生理盐水配制成所需药液浓度,密闭后置4℃冰箱保存备用。1.1.3含药血清的制备6个月龄SD雌性大鼠用抗癌中药“卡宁”按4.8g/kg生药灌胃,按以上剂量每天2次灌胃,5-FU组腹腔注射5-FU0.2ml/只,隔日1次,3次后停止给药;第7天以水合氯醛每100毫克0.3ml腹腔注射麻醉后,腹主动脉采血,置离心管分离血清,滤过除菌,56℃30min灭活,-20℃冰箱保存备用。1.1.4实验分组分4组,每组设3个复孔,①对照组(未加任何药物);②5-氟尿嘧啶(5-FU);③含药“卡宁”血清1组(10%含药血清组);④含药“卡宁”血清2组(15%含药血清组)。1.2实验方法1.2.1细胞培养取对数生长期的人肝癌细胞株BEL-7402细胞,常规培养72h,制成细胞悬液,计数细胞浓度后将细胞按1×104/孔接种于含10%新生牛血清、抗生素(100U...

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