青狐尾草丛生芽诱导探究摘要将青狐尾草作为研究C4光合作用的模式植物，其转化体系还不成熟。由成熟种子胚诱导的愈伤组织再生获得植株效率较低，该试验对比含有不同浓度的6-BA和2,4-D诱导培养基对青狐尾草的丛生芽诱导效果，结果表明：改良后的MS培养基并添加6-BA2mg/L和2,4-D0.5mg/L组成的诱导培养基效果较好。因此，为青狐尾草的遗传转化寻找到一种比较好的转化对象。关键词青狐尾草；丛生芽；6-BA；2,4-D；诱导培养基中图分类号Q943.1文献标识码A文章编号1007-5739(2012)22-0153-01青狐尾草是NADP-ME型的C4植物，为单子叶植物［1］,是研究C4光合作用方面具有较大潜能的模式植物［2］。但在单子叶植物的遗传转化中，利用组织培养获得再生植株效率很低。因此，该试验探索了丛生芽的诱导浓度。1材料与方法1.1种子的灭菌及播种用次氯酸钠溶液灭菌后，将种子稍稍晾干，用药匙均匀撒在MS基本培养基上。1.2外植体获得将培养皿放在培养箱中置于（23±2）°C.黑暗条件下萌发。3~4d后种子开始萌发，在胚轴生长到0.5~2.0cm时,切取幼苗的芽尖放在诱导培养基上诱导丛生芽。根据姜素云等黑麦草丛生芽的培养方法[3],设置了含有不同浓度6-BA和2,4-D的诱导培养基（表1）。MS基本培养基选用康奈尔大学Burtnell实验室培养青狐尾草愈伤组织的MS基本培养基配方。1.3培养条件培养的条件为：18h时光照，6h黑暗；光照强度为600~800lx；温度（23±2）°CO2周后形成丛生芽块，可看到明显膨大的叶鞘。将叶鞘和幼叶剥离丛生芽块，计算丛生芽的芽原基数及芽尖数。2结果与分析播种在基本培养基上的青狐尾草种子暗培养3〜5d后，大部分开始萌发。在黑暗条件下，下胚轴伸长较快，在芽轴长度小于2cm时将0.5mm的芽尖切下摆放在诱导培养基上,每皿可摆放25个芽尖。在丛生芽的诱导过程中，外源激素的浓度配比非常重要通过统计诱导出的芽尖数和平均芽原基数，选择效果较好的浓度。通过对比发现，当2,4-D浓度为0.5mg/L.6-BA浓度为2mg/L时，产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。因此，选择培养基G为诱导培养基（表2）。3讨论在诱导培养过程中，2,4-D与细胞分裂有关，6-BA与植株再生细胞的分化有关[4-6]o通过对比不同激素组合的诱导培养基的诱导效果，在不含2,4-D和6-BA的培养基中，芽尖很快褐化死亡；在6-BA浓度低于2mg/L、2,4-D浓度低于0.5mg/L时，产生丛生芽的芽尖数较少，大部分芽尖死亡；当6-EA浓度高于2mg/L时，不管2,4-D浓度高低,芽尖切口产生的白色细胞团较小，细胞分裂少，进而产生的丛生芽芽原基很少，而且芽尖容易生长成为绿色叶片，不再具有分裂能力；当6-BA浓度适宜、2,4-D浓度过高时，芽尖切口细胞能力较强，容易分裂膨大为一个细胞团，水渍化严重，后期不容易转变为丛生芽，分化能力不强。通过对比发现，当2,4-D浓度为0.5mg/L、6-BA浓度为2mg/L时,产生丛生芽的芽尖数、平均芽原基数最多。因此，选择该激素组合添加入诱导培养基中，其与已有的再生体系相比，青狐尾草丛生芽获得再生植株比较容易，被认为是一个比较好的转化材料[7-9]o4参考文献[1]KELLOGGEA.PhylogeneticaspectsoftheevolutionofC4photosynthesis[M]//RFSAGE,MONSONRK,C4PlantBiology.SanDiego,CA：AcademicPress,1999：411-444.[2]ZHUXG,LONGSP,ORTDR.Improvingphotosyntheticeffciencyforgreateryield[J].AnnRevPlantBiol,2010,61(10)：235-261.[3]姜素云，胡孝瑞，晁相蓉，等•黑麦草高效丛生芽的发生及离体开花的初步研究[J].草业学报，2005,14(6)：100-106.[4]孙骏威，方晓峰，陈珍•不同植物生长调节剂对黄秋葵组织培养的影响[J]•北方园艺，2012(7)：139-141.[5]庾韦花，蒙平，张向军，等.牛尾菜丛生芽诱导及再生体系研究[J]•广西农业科学，2010,41(7)：646-648.[6]韦莹，李力，张占江，等.罗河石斛的组织培养与快速繁殖[J].植物生理学报，2010(12)：1257-1258.[7]罗晓青，蒙秋伊，查兰松，等•兴仁金线莲丛生芽诱导增殖研究[J].安徽农业科学，2012,40(22)：11231-11232,11260.[8]杨清林，管天冰，戴传天.台湾金线莲丛生芽的诱导与增殖研究[J].安徽农业科学，2012,40(17)：9209-9210.[9]孙昕，闫帆，赵健如，等•大豆子叶节丛生芽的诱导研究[J].大豆科学,2012,31(2)：184-187,192.
