夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒及相关免疫活性初步研究【摘要】目的探讨夏枯草多糖抗单纯性疱疹病毒（HSV）及相关的免疫作用。方法通过96孔板病毒中和实验，观察细胞致病作用（CPE），体外研究夏枯草多糖的抗病毒作用，同时通过淋巴细胞转化增殖及细胞因子（IFN-γ）诱生实验研究夏枯草多糖的免疫活性。结果夏枯草多糖各部位（20mg/ml）分别在24，48h内可减轻CPE，直接杀灭病毒作用较弱；免疫学试验表明体外均能明显促进淋巴细胞转化增殖，且有明显的剂量依赖性，并均能明显诱生IFN-γ。结论夏枯草多糖用于单纯性疱疹的治疗作用，可能不是由对病毒的直接作用引起的，而是促进淋巴细胞转化增殖和诱生干扰素等免疫调节作用的结果。【关键词】夏枯草多糖单纯性疱疹病毒免疫活性Abstract:ObjectiveTostudytheanti-herpesvirus(HSV)andrelatedimmunocompetenceofpolysaccharidesofPrunellavulgarisL.(XKCst).MethodsTheantiviruseffectofXKCswasevaluatedbycytopathiceffect（CPE）invitrothroughvirusneutralizationtestandtheimmuneactivityofXKCswasstudiedthroughlymphocytetransformationtest（LTT）andcytokine(IFN-γ)inductiontest.ResultsThevariousactivefractionsofXKCs(20mg/ml)mightreduceCPEin24or48h,indicatingtheirdirecteffectonviruswasweak,howevertheimmuneexperimentsindicatedthatitcouldinduceIFN-γobviouslyandpromotethelymphocytetransformationandpropagationremarkablywithobviousdosagedependenceaswell.ConclusionThetherapeuticaleffectofXKCsonherpesvirusmightbetheresultsoftheimmunitycontrolactions,suchasthepromotionofthelymphocytetransformationandpropagationandtheinductiongofIFN-γ,ratherthanthedirectactiononvirus.Keywords:PrunellavulgarisL.;Polysaccharides;Herpesvirus(HSV);Immunocompetence单纯性疱疹病毒(herpesvirus，HSV)感染引起的生殖器疱疹（GH）往往较难治愈且经常复发，给患者带来了巨大的身心痛苦。目前，化学药物的治疗仍需配合免疫增强剂方可达到较好的治疗效果，而中药因兼具抗病毒和提高免疫等作用而日益被重视。《中国药典》收载品种夏枯草为唇形科植物夏枯草PrunellavulgarisL．的干燥果穗，有清火、明目、散结、消肿的功效［1］。已往对夏枯草的研究往往集中于小分子的药理活性研究，对多糖的生物活性研究很少［2］，我们已从夏枯草中分离出水溶性多糖组分（粗多糖经DEAE-SepharoseF.F.柱、透析袋透析纯化，得到了多个多糖组分），并对各多糖组分进行了体外抗单纯性疱疹病毒（HSV）以及与抗病毒相关的免疫活性研究。本文对分离得到的夏枯草各多糖组分抗HSV及相关生物活性进行报道。1材料与方法1.1材料1.1.1药物夏枯草粗多糖：夏枯草药材加水煎煮提取两次（20倍水/次，1h/次），经85％乙醇醇沉，离心分离沉淀，沉淀真空干燥，即得粗多糖，以下简称XKC-C；夏枯草各多糖组分：XKC-C蒸馏水完全溶解（1g生药/ml），透析，高速离心（15000r/min），上清液经DEAESepharoseF.F凝胶柱，依次用水及0.2，0.5，1.0mol/LNaCl溶液梯度洗脱，分别分离得多糖部位XKC00，XKC02，XKC05，XKC10。其中XKC00为均一分子量多糖（26kDa），XKC02经进一步透析，可分得两个均一分子量多糖XKC02-A（130kDa），XKC02-B（5600Da），XKC05，XKC10均达到有效部位标准。1.1.2细胞与动物非洲绿猴肾细胞(Verocellline)购自华西医科大学；HSV-1、HSV-2购自中国科学院武汉病毒研究所，本实验室在Vero细胞上繁殖，常规传代后液氮保存。Balb/c小鼠，6～8周龄，18～22g。1.1.3试剂细胞培养基质RPMI-1640（GIBCO，美国）；胰酶（DIFCO，进口分装）；小牛血清（华西生化制品厂）；琼脂糖（浙江省洞头县水产公司海生物化工厂）；3H－胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）（中国科学院上海原子核研究所）；刀豆蛋白A（ConA）（Sigma）；IFN-γELISA试剂盒(美国)；49型玻璃纤维滤纸（上海虹光造纸厂）；96孔板（Nunc）。1.1.4仪器NAPCO-5410型二氧化碳培养箱（美国）；β液体闪烁仪(LS9800型，美国Beckman)；Sunrise酶标仪（TECAN，西班牙）。1.2方法1.2.1样品细胞毒性将样...