细胞氧化―还原状态影响贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑[摘要]目的探讨贝母素甲对人白血病细胞K562细胞增殖的抑制效应，以及细胞氧化-还原状态失衡对此作用的影响。方法在体外培养K562细胞。运用四唑盐（MTT）比色法分析不同浓度贝母素甲（50、100、200、400、800μmol/L）处理24h对K562细胞增殖的影响，并用Bliss法计算药物对细胞的半数抑制浓度（IC50）。采用分光光度法分别分析药物处理对K562细胞内活性氧（ROS）与谷胱甘肽（GSH）含量的影响。结果贝母素甲能剂量依赖性的抑制K562细胞的增殖，IC50为238μmol/L。贝母素甲能诱导K562细胞产生ROS，下调其细胞内GSH含量，破坏细胞的氧化-还原平衡状态。活性氧清除剂N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）与GSH的预处理可以抑制贝母素甲的上述效应。结论贝母素甲可抑制K562细胞增殖，细胞氧化-还原失衡可能在这一过程中起重要作用。[关键词]贝母素甲；K562细胞；氧化-还原；细胞增殖[]R733.7；R285.5[文献标识码]A[]1673-7210（2017）06（c）-0016-04[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofpeimineoncellproliferationofhumanleukemiaK562cellsandthefunctionofredoximbalanceinthisprogress.MethodsThehumanleukemiaK562cellswereculturedinvitro.AfterK562cellsweretreatedwithpeimineatconcentrationsof50，100，200，400and800μmol/Lfor24h，thecellproliferationwasmeasuredbythiazolylbluetetrazoliumbromide（MTT）assay.Andthehalfmaximalinhibitoryconcentration（IC50）ofpeiminewascalculatedusingtheBlissmethod.Thechangesofintracellularreactiveoxygenspecies（ROS）andglutathione（GSH）concentrationweredetectedusingspectrophotometry.ResultsPeimineinhibitedtheproliferationofK562cellsinadose-dependentmanner.AndtheIC50ofpeiminewas238μmol/L.Furthermore，peiminecouldpromotetheROSproductionandglutathione（GSH）depletion.Thebalanceofoxidation-antioxidationfunctiondestroyed.Pre-incubationwithantioxidantsGSHorNacetylcysteine（NAC）almostabolishedtheeffectsofpeimine.ConclusionThepresentstudythereforeshowsthatpeimineinhibitstheproliferationactivityinK562cells.Theredoximbalancemayplayakeyroleinthisprocess.[Keywords]Peimine；K562cells；Redox；Cellproliferation浙?母为临床常用止咳化痰中药，始载于《本草正》，为贝母属植物浙贝母（FritillatiathunbergiiMiq.）的干燥鳞茎[1]。贝母素甲（Peimine）是浙贝母的主要药效成分之一[2]，对多种肿瘤细胞的生长有抑制作用，能逆转肿瘤细胞的多耐药现象[2-7]。以浙贝母为君药的复方淅贝母颗粒能提高难治性急性白血病围化疗期临床缓解率[8]。尽管这些研究提示贝母素甲具有抗肿瘤活性，但其对慢性粒细胞白血病（chronicmyeloidleu？鄄kemia，CML）细胞增殖影响的研究依然甚少，诸多相关问题有待厘清。细胞在生命活动过程中会产生活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）。同时，细胞中还存在谷胱甘肽（glutathione，GSH）、过氧化氢酶（catalase，GAT）等构成的抗氧化系统，可清除过多的ROS，避免细胞受到过度的氧化损伤[9]。ROS的生成与清除之间的动态平衡使细胞处于一个正常的氧化-还原状态，维持细胞生长、增殖等正常生命过程[10-12]。此状态的失衡会导致细胞活力下降，甚至死亡。Bcr-Abl突变的CML细胞ROS水平比正常细胞高，对氧化-还原状态的改变更为敏感[13]。一些药物可通过诱导肿瘤细胞ROS爆发、GSH含量下调，抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡，从而起到抗肿瘤的效果[14-16]。对此，本项研究采用人白血病细胞株K562为体外研究模型，试图从细胞氧化-还原状态变化的角度分析贝母素甲对人白血病细胞体外增殖的影响机制，为贝母素甲用于人白血病治疗提供实验依据。1材料与方法1.1实验材料人慢性粒细胞白血病细胞株K562由福建中医药大学中西医结合基础实验室保存。1.2实验药物贝母素甲（Peimine，纯度>98%）产自美国阿拉丁工业公司。称取21.6mg贝母素甲，采用0.2mL无水乙醇助溶，再加19.8mLRPMI1640培养基，配制成50mmol/L工作液...