基于反相液相色谱的人血中茶碱浓度临床检测与分析［摘要］目的：建立快速、简便、准确、重现性好的人血中茶碱的测定方法。方法：采用HypersilODSC18（4.6mmX250mm,5nm）为色谱柱，流动相为甲醇-水（25：75）,内标物为咖啡因，检测波长为274nm,血清用甲醇沉淀蛋白后进行分析。结果：茶碱标准曲线回归方程为Y=0.0539X+0.038,1-0.9994（n=8）,1〜40ug/ml浓度范围线性关系良好。对36例患者作血清茶碱浓度监测，临床效果良好。结论：本测定方法为临床药师指导临床有效、安全的个体化药物的使用提供了保障［关键词］茶碱；血药浓度；RP-HPLC；个体化用药［中图分类号］R927.2［文献标识码］A［文章编号］1673-7210（XX年科、ICU连续使用茶碱6d血药浓度达稳态时的住院患者（共计36例），于次日早上7：00左右空腹取血行茶碱的血药物浓度检测。结果显示，患者茶碱血药浓度在2〜26ug/ml之间。见表4表436例住院患者茶碱血药浓度的测定结果3讨论3.1茶碱血药浓度检测方法的选择目前，常用茶碱的测定方法有高效液相色谱法（HPLC）、紫外分光光度法（UV）、荧光偏振免疫分析法（FPIA）、化学发光酶免疫法（CLEIA）o紫外分光光度法测定茶碱的血药浓度［3-4］在这几种方法中成本最低，但灵敏度及分辨率差，计算麻烦；荧光偏振免疫分析法和化学发光酶免疫法操作简单，专属性高，但荧光偏振免疫分析法需要TDx仪来测定血药浓度，价格昂贵；化学发光酶免疫法定标有效期短［5-7］o本实验对茶碱血药浓度的检测，首先考虑方法有效性（专一性强、灵敏度好、变异系数低、回收率高），其次是周期短、成本低、样本处理简单等因素，故采用高效液相色谱法3.2HPLC法检测茶碱血药浓度的条件选择3.2.1流动相的选择在HPLC测定茶碱的方法中，目前文献报道的茶碱测定的流动相选择主要为醋酸盐缓冲液-乙睛⑻、甲醇-水［9］、磷酸二氢钾-乙睛［10］、甲醇-水-醋酸溶液［11］、三乙胺缓冲液-甲醇［12］,笔者对比了流动相甲醇-水和甲醇-水-醋酸盐缓冲溶液两者的保留时间和峰面积基本一致，甲醇-水-醋酸盐缓冲溶液峰形更尖锐，峰高更高。两者都能对茶碱进行很好的色谱分析，但甲醇-水作为流动相廉价易得，更为经济，而且比使用含有醋酸缓冲液的流动相更能延长分析柱的寿命，因此本文建议采用甲醇-水为流动相。同时也发现流动相中随着甲醇比例的提高，茶碱的保留时间明显缩短，当甲醇比例太高，茶碱组分分离效果不理想。通过预试验最后确定甲醇-水（25:75）作为流动相。此比例茶碱的出峰时间亦在5min左右,保留时间均在15min以内，是主峰出峰时间的3倍。而且被测成分分离效果较好,峰形也良好3.2.2样本处理方法的选择血浆样品的处理方法有萃取法、蛋白沉淀法等。二氯甲烷-异丙醇［13］、氯仿-异丙醇萃取［14］。萃取法的血样本干扰少，最低检测限高。但其操作繁琐，操作一致性和稳定性较差，同时有机溶剂（如氯仿）对人体伤害大。有文献报道蛋白沉淀法选用三氯醋酸、高氯酸、甲醇等作为蛋白沉淀剂，前两者提取回收率较高，但考虑到酸性沉淀剂可能损坏色谱柱，故选用甲醇沉淀蛋白［15］3.3临床茶碱监测与分析影响血药浓度的因素是多方面的，它与药物剂型、给药剂量、给药间隔、给药方式、患者的生理状况、病理状况等是密切相关的。茶碱的药理作用与血浓度有关，其有效血浓度安全范围很窄，茶碱浓度维持在5〜15Ug/ml可达到较好的疗效，超过XX年人血浆蛋白减少，会使游离型药物增多；机体水分减少，脂肪增加，药物血药浓度增高，不良反应增加。有9例血药浓度小于5Ug/ml,一是可能诱导了P450肝药酶，如酗酒、吸烟等，使其血药浓度下降。二是与其他药物配伍使用有关，如钙拮抗剂以及偏酸性的药物。三是给药剂量、间隔不当，正常成年人茶碱的半衰期为（8.7±2.2）h,如1日1次普通片剂或是尽管1日2次普通片剂，但2次间隔很近或是剂量不足，不能达到有效的血药浓度。这些因素都会影响茶碱在体内的分布、吸收、代谢及排泄，从而影响了患者体内的血药浓度。尽管影响茶碱的血药浓度因素有很多，但是依据此方法检测出的数据，并做适当的调整，使茶碱的给药剂量更加安全、有效［参考文献］［1］王广基•药物代谢动力学［M］.北京:化学工业出版社...