吴茱萸对大鼠肝线粒体呼吸功能的影响吴玉霞（江西中医学院330004）黄丽萍（江西中医学院药学院330004）中文摘要目的：本试验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度，探索吴茱萸对机体呼吸功能的调控机制，以证实吴茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响。方法：采用Clark氧电极法测定大鼠肝脏线粒体在密闭反应体系中耗氧的变化，以确定线粒体耗氧速率。结果：与空白组比较，给药组有较高的RCR，差异显著。结论：吴茱萸组通过加快Ⅲ态呼吸耗氧速率，降低Ⅳ态耗氧速率而提高RCR。关键词吴茱萸；肝脏线粒体；呼吸功能ABSTRACTPurpose:ToprovetheeffectofEvodiarutaecarpaontherespiratorysystemofmitochondriainmouseliver,theindesofthesehavebeendetected,andalsotheRegulatorymechanism.Methods:TheClarkoxygenelectrodeisusedtotestthechangeofoxygen,whichconsumedbymitochondriuminmouseliver,tocalculatetherateoftheconsumptionofmitochondrialoxygen.Result:Comparedwiththeblankgroup,theadministrationgrouphaveahigherlevelofRCR,andthedifferencewasobvious.Conclusion：EvodiarutaecarpaishelpfultothehigherlevelofRCR,byacceleratingtherateoftheoxygenconsumptionofstate,andreducingthatofstateⅢ.ⅣKeywordsEvodiarutaecarpa；livermitochondria;respiratorychainfunction前言现代实验已证实,寒证的出现可能与人体能量代谢降低有关，由于能量代谢降低，身体热量不足，体温较低，呼吸缓慢，心跳减慢，心搏出量减少，体表毛细血管及小动脉反射性收缩，大脑皮层兴奋性减低而产生上述一系列“寒”的证候[1]。温里药具有温中散寒、补火助阳、回阳救逆等功效，通过提高能量代谢对于寒证患者有很好的调节作用。吴茱萸为芸香科植物吴茱萸、石虎或疏毛吴茱萸的干燥近成熟果实，属热性中药代表，具有散寒止痛、降逆止呕、助阳止泻的功效。生物能量是维持机体生命的重要物质基础，能量代谢是人体物质代谢的最基本形式。线粒体是细胞活动的主要供能场所，是物质代谢和能量转化的中心站[2]。线粒体通过氧化磷酸化(oxidativephosphorylation，OXPHOS)生成大量ATP供应细胞内各种化学反应与功能的能量需要[3]。本实验尝试从给药组与空白组表征大鼠肝脏线粒体呼吸功能各指标变化的角度，探索吴茱萸对大鼠肝脏线粒体呼吸功能的影响，以期探讨热性中药影响能量代谢的途径与机制。正文1试验材料1.1试验动物健康雄性SD大鼠40只，体重220士20g，由江西中医学院实验动物中心提供。动物质量合格证编号:SCXK（赣）2006－0001；将大鼠按随机数字表法分为4组，每组10只动物，分别为吴茱萸20天组、吴茱萸30天组、吴茱萸40天组、空白组。试验期间动物均饲养于同一环境下，保持室温18～24℃，环境安静，动物随意进食进水，空白组给等体积生理盐水。所有动物于试验前12h禁食，但自由饮水。1.2试验药材吴茱萸，购自北京鹤元堂医药科技有限公司。1.3试验试剂蔗糖（solarbio）、甘露醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司）、EDTA-2K（国药集团化学试剂有限公司批号：F20080423）、KCl（上海实验试剂有限公司批号：200805025）、KH2PO4（天津市福城化学试剂厂批号：20080913）、Tris（solarbio）、HCL（上海焱晨化工实业有限公司）、线粒体提取试剂盒（碧云天生物技术研究所）、考马斯亮蓝G-250（sigma公司）、琥珀酸钠（sigma公司）、ADP-2Na（sigma公司）、JanusgreenB（sigma公司）、95%乙醇（天津市恒兴化学试剂制造有限公司批号：20090123）、85%磷酸（天津市恒兴化学试剂制造有限公司批号：20081203）。1.4仪器设备782-1ChannelOxygensystem（StrathkelvinInstruments），低温高速离心机（Thermo），-80℃冰箱（Thermo），DY89-Ⅱ型电动匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司），SC-15数控超级恒温槽（宁波新芝生物科技股份有限公司），722型可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司），GilsonP型移液器，SartoriusPB-10PH计，ELGApurelabUHQ超纯水机，分析天平（1/100、1/1000、1/10000、1/100000）（Sartorius）。2试验方法2.1实验试剂配置2.1.1线粒体呼吸功能反应介质：...