高血压颈动脉斑块阳性患者miR―375表达检测【摘要】目的探讨miR-375在高血压颈动脉斑块阳性患者的表达变化情况及其临床意义。方法检测23例高血压颈动脉斑块阳性患者（实验组）的血压和血清miR-375表达水平，并与12例健康者（对照组）比较。结果实验组的收缩压、舒张压、颈动脉内中膜厚度（IMT）和miR-375表达平均水平分别为（170.4±6.0）mmHg、（106.3±8.7）mmHg、（1.28±0.08）mm和（3.53±0.77），对照组分别为（132.2±3.8）mmHg、（86.4±6.6）mmHg、（0.83±0.17）mm和（2.36±0.76），实验组的收缩压和舒张压平均水平明显高于对照组（P<001），miR-375表达的平均水平也明显高于对照组（P<0.01）。结论miR-375或许作为致病因素，而不是保护因素参与高血压颈动脉斑块阳性疾病的发生和发展，miR-375过高表达对高血压颈动脉斑块阳性患者疾病可能有促进作用。【关键词】原发性高血压；颈动脉斑块阳性；miR-375；基因调控中图分类号：R544.1文献标识码：ADOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2015.01.004高血压颈动脉斑块阳性是慢性血管疾病的重要危险因素之一，其与慢性血管事件关系密切，研究表明，高血压及其动脉粥样硬化的发病率和患病率呈快速增长趋势，严重威胁居民的生命健康，备受关注[1]。miR-375是一类特异性高表达于胰腺组织的非编码小RNA，通过转录因子（NF-κB）和肌侵蛋白（myotrophin，MTPN）调控血管细胞的病理和生理，维持动脉的正常机能，miRNA表达水平对其与靶基因结合的效率及其转录的活性有影响，并与动脉粥样硬化的发生和发展相关联[2～7]。为探讨高血压颈动脉斑块阳性患者与miR-375表达水平的关联性，本项研究检测了23例高血压患者（实验组）的颈动脉内中膜厚度（IMT）和血清miR-375表达水平，并与12例健康者（对照组）比较，结果报道如下。1对象与方法1.1研究对象选取2014年1～5月在我院体检部接受体检者，符合下列条件：①连续2天检测符合下列条件为患者：收缩压≥140mmHg或舒张压≥90mmHg即可诊断为高血压[8]；②颈动脉超声测量颈总动脉（CCA）、颈内动脉（ICA）、颈外动脉（ECA）内IMT，其中IMT≥1.2mm，≤1.4mm者为斑块阳性。③排除血栓出血性疾病、糖尿病、免疫性疾病、严重感染、肿瘤、慢性中毒、继发性高血压。并经阅读《临床实验观察须知》，充分了解治疗方法及其观察措施，理解可能存在的风险，愿意配合治疗和观察，签署《同意书》者入选为实验组，共23例，男13例，女10例，年龄50～60（54.5±3.0）岁。对照组12例，男7例，女5例，年龄51～59（54.3±3.0）岁，收缩压<140mmHg并舒张压<90mmHg，颈动脉超声测量CCA、ECA、ICA内IMT，IMT<1.0mm。1.2方法①血压测量：使用经过验证的电子血压计，气囊长22～26cm、宽12cm的标准规格袖带。受试者应至少坐位安静休息5分钟，30分钟内禁止吸烟或饮咖啡，排空膀胱，取坐靠背椅，裸露上臂，上臂置于心脏水平，以Korotkoff第I音和消失音确定收缩压和舒张压水平。至少间隔5分钟再测量1次，取2次读数的平均值记录。如果2次血压值读数相差≥5mmHg，应再次测量，取3次读数的平均值记录。②颈动脉超声检查用仪器ALOKA-α10型超声显像系统，探头频率为7.5MHz。受检者取仰卧位，头略向后伸，转向被查的对侧，充分暴露颈部。先从锁骨内侧端横向检查颈总动脉，然后沿胸锁乳突肌外缘纵切扫查，依次显示CCA、ICA、ECA和椎动脉（VA）。1.3标本的采集与处置研究对象空腹10h以上于早晨7：00～8：00采集静脉血，用静脉真空采血管（BD762165PAXgeneBloodRNATube，由上海华雅思创生物科技有限公司提供）采全血4ml，血样采集后，立即将采血管上下颠倒10次混匀，并于18℃～25℃正---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---立放置至少2h。先于-20℃放置24h，然后转移至-80℃保存，于1M内用RN23RNAliquid超速全血（液体样本）总RNA提取试剂盒提取RNA。1.4实时荧光定量PCR检测miR-375的表达转染48h后，用Trizol试剂法提取总RNA。A260/A280为1.8～2.0之间方可用于检测。取500ng总RNA做逆转录反应。试剂盒提供RT及qPCR通用引物，操作步骤按试剂盒说明书进行。反应总体积为10μL，包含cDNA模板1...