盐酸川芎嗪在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞氧化应激中的作用[摘要]目的：探讨盐酸川芎嗪（2，3，5，6-tetramethylpyrazine，TMP）在长波紫外线（UtravioletA，UVA）诱导人皮肤成纤维细胞（Humandermisfibroblasts，HDF）发生氧化应激反应中的保护作用。方法：原代培养HDF细胞，用不同浓度TMP分别作用未经UVA照射以及经UVA多次照射的HDF细胞24h，48h，72h，CCK-8法检测TMP对HDF细胞体外增殖的作用；流式细胞术检测不同浓度TMP对多次UVA照射后HDF细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）总量的影响。结果：TMP在一定浓度范围内对HDF细胞的体外增殖无明显促进或者毒性作用，但对多次UVA照射后HDF细胞的体外增殖有一定的促进作用，且与浓度有一定的相关性，与UVA对照组比较有统计学意义（P<0.05）；TMP可清除UVA多次照射引起的HDF细胞内ROS累积，与UVA对照组比较有统计学差异（P<0.05），其作用效果能达未经UVA照射的水平。结论：盐酸川芎嗪（TMP）对长波紫外线诱导HDF细胞氧化应激有一定的保护作用。[关键词]HDF细胞；盐酸川芎嗪；增殖；ROS[]R758.1[文献标志码]A[]1008-6455（2015）03-0030-05Abstract：ObjectiveThestudywaspurposedtoresearchtheprotectionof2，3，5，6-tetramethylpyrazine（TMP）againstROSinhumandermisfibroblastsinducedbyUVA.MethodsWefirstisolatedhumandermisfibroblasts（HDF）fromhumanprepuceforprimaryculture，thenexposedHDFunderrepeatedultravioletAradiation.After24h，48h，72h，wetesttheeffectsofTMPwithdifferentconcentrationsonHDFinvitroproliferation.WealsodetectedthetotalROSinHDFafterrepeatedUVAbyflowcytometry.ResultsTMPmadenoeffectsonHDFinvitroproliferation，buthadacertainroleonHDFproliferationafterrepeatedUVA，whichhadacertaincorrelationwithconcentration，andtherewasasignificantdifferencewhencomparedwiththeUVAcontrolgroup（P<0.05）.TMPwasabletoeliminateROSinducedbyUVA，whichhadasignificantdifferencewhencomparedwiththeUVAcontrolgroup（P<0.05）andreturnthetotalROStothatbeforeUVAradiation.ConclusionTMPwascapableofprotectingHDFfromUVA，whichmightberelatedtotheeliminationofROS.Keywords：HDF；2，3，5，6-tetramethylpyrazine；proliferation；ROS紫外线长期慢性反复照射可使皮肤出现松弛、干燥粗糙、皱纹增多等光老化的表现[1]。皮肤光老化现象与成纤维细胞（Humandermisfibroblasts，HDF）的数量减少及分泌合成功能下降或异常有关。日光中的长波紫外线（UtravioletA，UVA）能穿透表皮，直达真皮层，直接损失成纤维细胞。UVA反复照射可使成纤维细胞内活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）堆积，超过了其清除能力，打破氧化与抗氧化平衡，发生氧化应激反应，调节一系列程序化的细胞反应[2]，甚至调控衰老相关的信号通路，促进细胞衰老的发生。有研究表明ROS在细胞内的堆积是皮肤光老化发生发展过程中的重要环节[2]。川芎嗪（2，3，5，6-tetramethylpyrazine，TMP），是川芎中的主要活性生物碱。研究表明[3]川芎能有效地抑制氧自由基产生，保护膜脂质不被氧化，防止DNA损伤发生。现代药理学研究发现盐酸川芎嗪具有可清除ROS[4]，抗氧化应激[5]，抗肿瘤[6]等作用。本实验研究盐酸川芎嗪对UVA多次照射后成纤维细胞的体外增殖及胞内ROS的影响，试图为其进一步成为潜在的光防护成分并应用于抗皮肤光老化提供一定的理论依据。1材料和方法1.1主要仪器和试剂UVA台式紫外线治疗仪（上海希格玛公司，SS-04A）；UVA辐射探测仪（上海希格码公司）；酶标仪（Thermo）；流式细胞仪（Guawa）；ROS试剂盒（LifeSciences）；高糖DMEM（含10%胎牛血清，Hyclone），CCK-8试剂盒（Sigma），盐酸川芎嗪注射液购自哈尔滨三联药业有限公司，国药准字H20030553。1.2细胞培养HDF为原代培养的人皮肤成纤维细胞，取自门诊健康青年男（年龄18～23岁）包皮环切术后进行标本分离的包皮组织，采用酶消化法分离留取HDF细胞进行原代培养，连续传代，取第3～10代的细胞进行实验。1.3细胞分组和UVA照射实验分组：20μg...