红景天酪醇对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用邹洪霞1张淑芹2张福明3陈显秋31长春市疾病预防控制中心130006;2吉林大学再生医学科学研究所130021;3吉林大学第一临床学院130012【中图分类号】R737.33【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)18-0162-02【摘要】目的研究红景天酪醇对体外培养的人宫颈癌Hela细胞的抑制作用。方法采用集落形成实验和MTT实验研究红景天酪醇对体外培养Hela细胞的杀伤作用。结果红景天酪醇明显影响Hela细胞的集落形成，抑制Hela细胞的活性和功能状态。结论红景天酪醇对Hela细胞的增殖兵有明显的抑制作用，提示红景天酪醇可能对宫颈癌具有一定的防治作用。【关键词】红景天酪醇宫颈癌Hela细胞高山红景天为景天科多年生草木植物，种类多，野生资源丰富，药理作用广泛。具有增强免疫，抗疲劳、耐缺氧，抗病毒，抗辐射，抗肿瘤等多种功效［1］。其中红景天甙和红景天酪醇为红景天中公认的主要活性成分，对红景天的疗效只有代表性作用［2］。木实验对红景天酪醇的抗肿瘤作用进行了初步研究，证明了红景天酪醇对体外培养的人Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用。1材料和方法1.1材料红景天酪醇由木实验室提纯，人宫颈癌Hela细胞、人羊膜细胞FL由木实验室保存。1.2药物的毒性实验将药物灭菌后用含2%小牛血清的细胞维持液分别配制成以下浓度：2500&mu;g/ml、2000&mu;g/ml、1500&mu;g/ml、1000&mu;g/ml、500&mu;g/mL100&mu;g/ml、50&mu;g/ml、25&mu;g/ml,传代人羊膜细胞FL于96孔培养板，待长成单层后加入上述浓度的药物，24h后观察结果。求出药物的最大无毒浓度和半数致死浓度。1.3集落形成实验［3】取对数生长期的Hela细胞接种于75mm平皿内(细胞悬液中单个细胞比例>95%）,每皿800个细胞，培养24小吋后分别加入上述3个浓度药物，继续培养9天，取出平皿倾弃培养液，PH6.18磷酸盐缓冲液洗涤2次，甲醇固定20分钟，10%Giemsa染色20分钟，去离子水冲洗，晾干,在解剖镜下计数每皿大于20个细胞以上的集落数，计算集落形成率，集落形成抑制率。抑制率=空白对照组集落数-实验组集落数/空白对照组集落数&times;100%。1.4MTT实验［4］用含10%小牛血清的RPMI1640培养液将Hela细胞配成悬液（l&times;105个/ml）加入96孔板，200&mu;l/孔。实验组加入不同浓度的红景天酪醇，分别培养24、48、72小吋，在额定的吋间吸去培养液，换上无血清的RPMI1640培养液，并加入MTT液20&mu;l,继续培养4小吋，弃去培养液，每孔加入酸化异丙醇200&mu;l,用酶标仪测570nm下的吸光值（A）。细胞生长抑制率=（1-实验组平均A值/对照组平均A值）&times;100%。2结果2.1药物的毒性实验结果，如图1所示。从图中可以看出，红景天酪醇对羊膜细胞的最大无毒剂量为500&mu;g/ml,半数中毒剂量为1000&mu;g/ml，因此实验时我们选择500&mu;g/ml、300&mu;g/ml、100&mu;g/ml为实验浓度。2.2药物的集落形成实验结果见表1表1红景天酪醇对Hela细胞集落形成的影响组别剂量（ug/ml）集落数对照组94.2&plusmn;6.08实验1组100ug/ml30.7&plusmn;0.76实验2组300ug/ml23.2&plusmn;1.26实验3组500ug/ml16.3&plusmn;0.79注：与对照组比较，*P<0.01从表1中可以看出，红景天酪醇能够有效抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，并且随着药物浓度的增加，Hela细胞的集落数逐渐减少。2.3MTT实验结果结果见表2,A值与细胞存活数存在线性关系，实验组A值明显低于对照组（P<0.01）,ii随着药物浓度的增加而降低。表2.红景天酪醇对Hela细胞生存率的影响组别剂量（ug/ml）生存率％实验1组100ug/ml52.34实验2组300ug/ml31.67实验3组500ug/ml19.733讨论红景天酪醇作用于Hela细胞24小吋后，细胞开始聚集、皱缩，胞质粗糙，颗粒状物质堆积。II随着时间的延长，药物浓度的增加，细胞形态的改变越明显。由于肿瘤细胞的生长具奋不受控制性，也无接触抑制，所以，形成集落的能力比正常细胞强，故集落形成实验是测定肿瘤细胞增殖能力的奋效方法之一,本实证明了红景天酪醇明显地抑制细胞的集落形成，对Hela细胞具冇较强的抗增殖能力，并且随着药物浓度的增加，集落数逐渐减少。MTT法是根据正常活细胞线粒体内活性脱氢酶可将MTT还原为紫色的甲潜，而且细胞的存活数与其产生...