原发性胆囊癌组织中Midkine的表达及其临床意义［摘要］目的观察Midine(MK)在原发性胆囊癌中的表达情况，并探讨其与原发性胆囊癌临床病理指标之间的关系。方法选择1995年1月〜2003年6月胆囊癌53例、腹腔转移灶12例、淋巴结转移灶12例和正常胆囊20例、胆囊腺瘤14例，均采用免疫组织化学方法检测MK在其中的表达情况；结合53例胆囊癌患者临床病理资料分析MK表达指数与组织学类型、分化程度、临床分期、局部淋巴结转移、肝脏浸润及腹腔广泛转移的关系。结果正常胆囊、胆囊腺瘤与原发性胆囊癌的MK表达标记指数(LI)中位数分别为0%、17%(5%,29%)、72%(41%,98%),三者比较差异有高度统计学意义(P<0.01)；胆囊淋巴结转移灶及腹腔转移灶Midkine表达LI的中位数分别为90%(76%,100%)、88%(65%,100%),二者Midkine表达LI与原发灶比较，差异有统计学意义(P<0.05)；结合临床病理资料统计分析发现，胆囊癌的分化程度越低，Midkine表达LI越高，差异有统计学意义(P<0.05)；Midkine在晩期胆囊癌中表达LI水平高于早中期，差异有统计学意义(P<0.05)；Midkine在伴有肝脏浸润灶中表达LI水平高于不伴肝脏浸润，差异有统计学意义(P<0.05)；Midkine在伴有广泛腹腔转移中表达LI水平高于不伴腹腔广泛转移，差异有统计学意义(P<0.05)o结论Midkine可作为胆囊癌新的标记物;Midkine表达与胆囊癌发生、发展有关，对胆囊癌的临床分期、浸润转移的估计和病人预后的判断有一定意义。［关键词］Midkine；表达；胆囊肿瘤；免疫组织化学---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---［中图分类号］R735.8［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2013)06(a)-0016-03Midkine(MK)是一种肝素结合性生长分化因子，已有研究表明，MK在多种人类恶性肿瘤组织中可检测到并呈过度表达［1-4］o越来越多的证据表明，MK参与了肿瘤的多种恶性生物学行为，如增殖、迁移、表型转化和血管生成。深入研究MK分子的表达及其与相关临床指标的关系具有重要意义。原发性胆囊癌发病过程隐匿，且侵袭力强，预后较差，大部分患者在发病后1年内死亡，3年生存率低于11%［5-7］。冃前对MK分子在胆囊癌组织中的表达情况及其在胆囊癌发生和演进中所扮演的角色缺乏认识。本研究采用免疫组织化学技术研究胆囊癌、胆囊腺瘤及正常胆囊中MK表达情况，并结合临床病理资料进行统计分析，初步探讨MK分了表达水平与胆囊癌临床病理特征的关系。1资料与方法1.1一般资料收集上海长征医院1995年1月〜2003年6月外科手术切除的胆囊癌标本53例、胆囊癌转移的淋巴结12例和腹腔转移灶12例。53例胆囊癌患者中男17例，女36例；年龄43〜82岁，中位年龄65岁；其中腺癌41例，其他(鳞癌黏液癌)12例；另收集14例胆囊腺瘤、20例正常胆囊(取自肝移植患者)作对照。14例胆囊腺瘤患者男5例，女9例；年龄42〜75岁，中位年龄64岁；20例正常胆囊者男7例，女13例；年龄44〜76岁，中位年龄67岁；胆囊癌的一些临床病理资料如组织学分型、分化程度、临床分期、有否局部淋巴结转移、腹腔转移及肝脏浸润等一并记录。其中，淋巴结转移34例，肝脏浸润17例，伴有腹腔广泛转移20例。羊抗Midkine---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---多克隆抗体冻干粉购自美国R&D公司，DAKOEnVisionTM二步法小鼠试剂盒购自丹麦DAK0公司。三组年龄、性别等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。1.2研究方法标本以10%甲醛的福尔马林液固定，石蜡包埋，4厚连续切片。MK多克隆抗体稀释度1：100o采用EnVision-步法。所有病理切片均经抗原修复。实验程序按试剂盒说明书进行，磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照[8]。1.3结果判定MK以细胞胞质内出现清晰棕红色颗粒为阳性判定标准，显微镜下观察在良好的组织结构及清晰的背景上细胞中出现棕红色颗粒为阳性，按以下方法计算MK的标记指数(labellingindex,LI)：每一切片在低倍镜下选择组织结构良好、背景清晰的5个阳性细胞最密集的区域，每个区域在高倍镜视野下(200X)计算100个细胞中的阳性细胞数，取5个区域阳性细胞数的平均值作为LI[9]o1.4统计学方法采用统计软件SPSS19.0对数据进行分析...