HMGA2在胃癌组织中的表达及意义陈家庄1赖铭裕2（通讯作者）韦丽秀1梁志海2（1南宁市广丙医科大学530021）（2广丙医科大学第一附属医院消化内科530021）【摘要】目的：探讨高迁移率蛋白HMGA2在胃癌组织、癌旁组织、正常胃黏膜组织中的表达及其意义。方法：采用RT-PCR及SP免疫组化法检测50例胃癌组织及对应的癌旁组织、正常胃黏膜组织中的HMGA2的表达，与临床资料做统计学分析。结果：在胃癌组织中HMGA2mRNA有68.0%（34/50）呈高表达，HMGA2在胃癌组织和癌旁组织、正常胃黏膜组织中的表达存在显著性差异（P<0.01）,HMGA2的表达与和胃癌患者淋巴结转移及临床分期有相关性（均P<0.05）。结论：HMGA2在胃癌中呈过度表达，可能成为胃癌诊断及良恶性鉴别诊断指标之一。【关键词】高迁移率蛋白A2胃癌逆转录-聚合酶链反应免疫组化【中图分类号】R730.23【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）07-0057-03胃癌是人类常见的恶性肿瘤，居全球肿瘤发病和癌症死亡率的第二位［1］。尽管近年来对胃癌的研究取得了进展，但大多数患者有临床症状时都己处于晚期并出现远处转移。HMGA2是近年来研宄的热点癌基因之一，其属于高迁移率蛋白A家族中的一员，含有3个AT-钩结构与和1个酸性C末端。HMGA2蛋白是一种非组蛋白染色体蛋白，木身缺乏转录活性，但能通过与染色质结合而改变其结构，或者直接与相关蛋白结合发生作用，继而调节其他基因的转录［2］。研究表明HMGA2蛋白的表达参与人类多种肿瘤的发牛.，如肺癌、卵巢癌、大肠癌、胰腺癌、脂肪瘤等。木实验通过采用RT-PCR及SP免疫组化法检测50例胃癌组织及对应的癌旁组织、正常胃黏膜组织中的HMGA2的表达，同时分析患者的发病年龄、肿瘤大小，临床分期，淋巴转移等情况，进而探讨HMGA2与胃痛的关系。1材料与方法---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.1材料选取广西医科大学第一附属医院2009年9月至2010年9月接受胃大部切除术的胃癌标本50例，均经组织病理学检查证实，所冇标本术前均未接受非逛体抗炎药治疗及放化疗。男38例，女12例，年龄28〜71岁，中位年龄52.7岁。其中高分化、中分化癌17例，低分化、未分化癌33例，未侵及浆膜者19例，侵及浆膜者31例，发生局部淋巴结转移者26例，无局部淋巴结转移者24例，TNM分期：1、II期共28例，III、IV期共22例。冋吋取距癌缘5cm的癌旁组织50例，正常胃黏膜组织50例作为对照组。TrizoI试剂盒，逆转录试剂盒均购自上海生物工程科技公司；2&times;TaqPCRMasterMix购自北京天根生化科技有限公司；试剂采用兔抗人HMGA2多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司，SP试剂盒，DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物科技公司。1.2方法1.2.1PT-PCR法将胃癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜组织约100mg用Trizol法提取总RNA,用紫外分光光度计在260和280nm处测吸光OD值，计算RNA含量和纯度。按cDNA逆转录酶试剂盒说明书进行操作，取3&mu;gRNA逆转录为cDNA,以cDNA为模板进行PCR扩增,PCR引物由上海生物工程科技公司合成。HMGA2上游引物序：5-CGAAAGGTGCTGGGCAGCTCCGG-3；下游引物序列:5-CCATTTCCTAGGTCTGCCTCTTG-3,产物长度为323bp。内参GAPDH上游引物序列：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,下游引物序列：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,产物长度401bp。反应条件：第一步，95°C预变性5min；第二步，94°C变性40s、58°C退火40s、72°C延伸40s,共30个循环；第三步，72°C延伸10min。反应体系共25&mu;L。取PCR扩增产物行2%琼脂糖凝胶电泳（含核酸染料），用凝胶分析仪照相分析。以（S的条带的灰度值-背景灰度值）/（内参灰度值-背景灰度值）的值表示HMGA2mRNA的相对表达量。1.2.2免疫组织化学法所奋标本均经10%甲醛固定常规脱水、透明、渗蜡、包埋4&mu;m厚连续切片，常规脱蜡、水化，采用免疫组织化染色超敏两步法(SP染色),DAB显色，苏木素复染，吹干，具体操作按SP试剂盒说明书进行，---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---阴性对照采用生理盐水磷酸盐缓冲液PBS代替一抗。HMGA2以胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性表达。应用全自动图像分析仪，Image-ProPlus6.0...