3DNA指纹图谱分析方法DNA指纹图谱泛指一切具有某一种质特异性的谱带，目前它是区分不同的种质资源，鉴别不同种和品种的有力T具，且不受组织部位、发冇时期和外界环境等因素的彩响。H前,在石斛属植物上应用较多的主要有以下5种。3.1RAPD图谱朱胜男等［1］利用18条RAPD引物就区分开31种石斛属植物。肖鲍等［2］则报道了用RAPD技术构建石斛属内7种石斛和一种冇仙桃屈植物的RAPD指纹图谱。而在种内，包英华等⑶和丁鸽等⑷分别采用RAPD技术分析了不同产地的野生美花石斛(D.loddigesii)和铁皮石斛，筛选的引物均能有效地鉴别备自不同的野生居群。上述丰富的扩增多态性证明，RAPD技术对石斛种质及其石斛伪品的鉴定是有效的。3.2AFLP图谱Zhu和Li［5J利用AFLP技术分析了中国石斛的37个种和源于口木、韩国的63个石斛杂交品种，8对引物共扩增出1655条多态性带。白音⑹利用筛选的X种coRI和Msel选择性引物纟R合也将41种药用石斛及其混淆品完全区别开。Li等⑺则利用AFLP标记技术分析了12个铁皮石斛居群，发现居群内存在遗传分化，而居群间遗传变异达26.97%。这些结果证明，AFLP标记可用于石斛原生种、商业品种以及混淆品的指纹图谱研究，而对石斛居群遗传多样性和居群结构研究同样有效。虞泓等［23］采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术对石斛内4个种和1个外类群种进行基闪纟H.DNA多态性分析.结果从64对引物组合中选出5对引物组合构建了5个种的DNA图谱•通过聚类分析。石斛属4种植物聚成一个大类，彼此关系得到了很好的分辨，并获得了bootstrap检验的有力支持•该实验充分说明AFLP技术可用于药用石斛DNA指纹图谱研究.3.3SSR图谱Yue等［8］以42个石斛杂交品种为材料开发了14个SSR多态性标记，并将其用于石斛品种鉴定和石斛新品种的保护。Gu等⑼首次报道了12对铁皮石斛SSR标记，随后谢明璐等［10］开发了60对铁皮石斛的SSR引物，其中15对引物鉴定岀等位变异92个，Lu等［11］、Xu等［12］也报道了新的铁皮石斛SSR引物，部分引物具有种间通用性，而C“i等［13］和郑基阳等［14］则分别报道了霍山石斛与美花石斛的新SSR标记。目前，开发的SSR标记还是有限的，虽然开发新的SSR标记需要知道重复序列两端的序列信息，给该标记的利用带来了一定的困难，然而一旦引物确知,在石斛等植物上就显现出较高的应用价值。3.4ISSR图谱Shen等［161和杨立昌等［17］利用该技术建立了铁皮石斛等种和居群的ISSR指纹图谱和鉴别条形码。刘明珍等［18］利用ISSR标记技术检测了霍山产的几种石斛与其他产地的石斛，发现它们在ISSR指纹图谱上存在着显著而稳定的养异，呈现明显的药材道地性。可见ISSR指纹图谱分析技术在石斛属植物鉴定研究中具有较大的应用价值。沈洁等［24］通过筛选引物并设定影响铁皮石斛ISSR反应的诸因了的不同浓度，检测ISSR不同反应体系的扩增效果；通过分析非特异性条带的产生原岗并进行条件优化.建立起铁皮石斛ISSR稳定可靠的反应体系.利朋此优化系统。对铁皮石斛的10个居群进行了扩增，得到了背景清晰、多态性稳定丰富的DNA扩增片段.表明ISSR技术可以较好地应用于铁皮石斛的居群鉴别及居群分了生态的研究.沈颖等［25］选取10条由SSR组成的引物，对9种石斛进行PCR扩增及琼脂糖电泳分析.结果显示，10条引物中有7条扩增出多态性条带，毎条引物可检测的多态性位点最少7个，最多14个，扩增片段大小为220-1260bp,其中，引物UBCS07和UBC864具有较高的多态性条带比率，均可以独立将所有被测种区分开来.ISSR.PCR作为一种简便、可靠的分了标记鉴定技术.可以作为石斛属种间鉴别的方法2—・沈洁等［26］从76条引物筛选了10条引物进行ISSR扩增来鉴别8种石斛药品•总共扩增出T127条条带，其中115条多态性条带(占总条带的90.50).找到了16个特异的鉴定标记.为了增加鉴定的有效性，ISSR指纹标记建立了6个多态惟条带用于鉴定石斛中成药，准确地鉴别出8个野生种的石斛药品.3.5SRAP图谱3等［19］和Ding等［20］采用该技术研究美花石斛和铁皮石斛的不同居群，发现居群内和居群间均检测到较高的遗传分化。李静［21］利用SRAP标记分析了40个石斛兰品种，2()对引物共获得295条多态性条带，发现石斛兰种质的聚类与其遗传背呆有很大...