五种中药制剂体外抗呼吸道病毒效果及细胞毒性的研究【摘要】目的了解5种中药制剂体外抗流感病毒、柯萨奇病毒和呼吸道合胞病毒的效果，为抗病毒性感冒新药研发提供依据。方法建立流感病毒感染MDCK细胞、柯萨奇病毒和呼吸道合胞病毒感染VeroE6细胞的模型，以细胞病变效应(CPE)为观察指标，了解不同浓度5种中药制剂体外抗病毒效果及细胞毒性。实验中以病毒唑作为对照药。结果1～5号中药制剂对MDCK细胞未出现细胞毒性的最小稀释度分别为1∶20、1∶40、1∶20、1∶80和1∶400，对VeroE6细胞则为1∶40、1∶80、1∶20、1∶20和1∶100。1～5号中药制剂出现对流感病毒的IC50值分别为1∶200、1∶100、1∶400、1∶200和1∶400，对柯萨奇病毒的IC50值分别为1∶50、1∶50、1∶100、1∶200和1∶200，对呼吸道合胞病毒的IC50值分别为《1∶25、《1∶50、1∶200、《1∶25和1∶100。结论综合药效和细胞毒性实验结果，3号中药制剂可以作为抗病毒性感冒新药的首选制剂，其次为4号中药制剂。【关键词】中药制剂;抗病毒作用;呼吸道病毒;细胞病变效应;细胞毒性Abstract：ObjectiveTodeterminetheanti-respiroviruseffectsinvitroandcytotoxicutyoffiveChinesedrugpreparations.MethodThemodelsofinfluenzavirusinfectingMDCKcells,coxsackievirusandrespiratorysyncytialvirusinfectingVeroE6cellswereestablishedinthisstudy.Byusingcytopathiceffect(CPE)astheindex,theantiviruseffectsinvitroandcytotoxicityoffiveChinesedrugpreparationswereinvestigated.Inthesetests,ribavirinwasusedasthecontrol.ResultsTheminimaldilutionsnotpresentingcytotoxicitytoMDCKcellsofNo.1~5Chinesedrugpreparationswere1∶20,1∶40,1∶20,1∶80and1∶400,whilethattoVeroE6cellswere1∶40,1∶80,1∶20,1∶20and1∶100,respectively.TheIC50valuesofNo.1~5Chinesedrugpreparationstoinfluenzaviruswere1∶200,1∶100,1∶400,1∶200and1∶400dilutions,whilethattocoxsackieviruswere1∶50,1∶50,1∶100,1∶200and1∶200dilutions,andthattorespiratorysyncytialviruswere《1∶25,《1∶50,1∶200,《1∶25and1∶100dilutions,respectively.ConclusionsCombiningtheexperimentalresultsofdrugactionsandcytotoxicities,firstlytheNo.3preparationandfollowedNo.4preparationcanbeusedfordevelopingnewanti-viralcolddrugs.Keywords：Chinesedrugpreparations;antiviruseffect;respirovirus;cytopathiceffect;cytotoxicity天然药物有许多化学药物不具备的优点，如毒副作用小、不易诱导耐药性等。中药是天然药物重要之一。我国的中药资源极为丰富，应用历史悠久，在长期的实践中积累了很多资料和经验[1,2]。相对于抗菌药物而言，目前临床上使用的抗病毒药物种类少，疗效也不十分确定。因此，从中药中筛选具有抗病毒作用的中药制剂或有效成分是研制新型抗病毒药物的有效途径之一。本次研究对养生堂研制的5种抗病毒中药制剂的体外抗流感病毒、柯萨奇病毒和呼吸道合胞病毒的作用进行了观察，以期为进一步开发提供药效学依据[3]。1材料与方法1.1受试药物和配制受试的5种中药制剂均由养生堂提供。对照药病毒唑由江苏省宿迁市制药厂生产。五种中药制剂临用前均经121℃15min高压灭菌，冷却后置4℃备用。5种中药制剂和病毒唑分别用含2.5%小牛血清DMEM培养液(GiBco)稀释为工作液。1.2细胞株及培养MDCK和VeroE6细胞均由浙江大学医学院病原生物系提供。培养基为含10%小牛血清DMEM(GiBco)。1.3病毒株流感病毒A3(H3N2)株购自中国医学科学院病毒研究所，柯萨奇病毒B4株和呼吸道合胞病毒E6株均购自中国科学院武汉病毒研究所。1.450%组织细胞感染剂量的测定各病毒株用2.5%小牛血清DMEM稀释成不同浓度的病毒液。流感病毒接种MDCK细胞，柯萨奇病毒B4株和呼吸道合胞病毒E6株接种VeroE6细胞，37℃培养7d后观察感染细胞圆缩、脱落等细胞病变(cytopathiceffect,CPE)情况，以测定各病毒引起50%组织细胞病变的感染剂量(50%tissuecultureinfectivedose,TCID50)。1.5药物的细胞毒性试验分别将不同稀释度的5种中药制剂(1∶10～1∶1600)和对照药病毒唑...