开心散对D半乳糖致衰老小鼠非酶糖基化和自由基的抑制作用研究作者：周高超王华王袆丹高向东【摘要】目的探讨开心散对衰老小鼠的高级糖基化终末产物（AGEs）和自由基的抑制作用。方法建立D-半乳糖诱导的亚急性衰老模型，用开心散进行治疗，观察其对衰老模型小鼠脑、肝脏的高级糖基化终末产物（AGEs），SOD活力以及MDA含量的影响。结果开心散能够明显改善D-半乳糖诱导的衰老小鼠的学习记忆障碍，显著提高衰老小鼠的脑、肝脏中SOD的活力，降低AGEs，MDA的含量。结论开心散可能通过降低体内AGEs的含量以及清除自由基的作用来改善D-半乳糖诱导小鼠的学习记忆能力。【关键词】开心散高级糖基化终末产物抗氧化学习记忆Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofKaixinPowderonnonenzymaticglycosylationandfreeradicalsinagingrat.MethodsMimeticdementiamodelinducedbyD-galactosewasused,andtheabilityoflearningandmemorywasmeasuredbywatermazetask.ThecontentsofAGEsandMDAaswellasactivitiesofSODinbrainsandliversweredetermined.ResultsTheresultsshowedthatKaixinPowdercouldincreasethecorrectpercentageinthewatermazetask.MeanwhileitwasfoundthatKaixinPowdermarkedlyelevatedSODactivity,andcouldreduceAGEsandMDAcontentsinbrainandliver.ConclusionKaixinPowdermayexhibititsanti-agingeffectsby,atleastpartially,inhibitingnonenzymaticglycosylationandreducingfreeradicals.Keywords:KaixinPowder;AGEs;Antioxidative;Learningandmemoryabilities开心散（KXS）是古代医籍《备急千金要方》所记载的益智类方剂之一，经过古人长期的临床实践，证实有良好的益智作用。近年的研究表明，非酶糖基化和自由基在衰老的发生发展中具有协同作用，因此同时拮抗非酶糖基化和自由基以切断它们之间的恶性循环，成为抗衰老研究的一个新的突破点。D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型可以显著增加小鼠体内血清AGEs含量，降低SOD活力等［1］，因此，我们以开心散研究对象，通过测定小鼠体内高级糖基化终末产物和自由基水平，阐明开心散抗衰老的可能机制。1材料1.1药物开心散由人参、远志、菖蒲、茯苓4味药组成。药材均购于南京市药材公司，经中国药科大学中药资源学教研室秦民坚教授鉴定符合药用规定。开心散按照人参10g，远志10g，菖蒲10g，茯苓20g的比例混合后，加9倍重量的水提取两次，1h/次，两次水提液合并后减压浓缩至干，使用时用蒸馏水稀释至所需浓度。1.2试剂D-半乳糖（D-Galactose，D-gal）上海试剂二厂，批号050719；脑复康（NFK），南京白敬宇制药有限公司，批号050811；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。1.3仪器四盲端六折角小鼠水迷宫，荧光分光光度计(CaryEclipse)，均由东南大学公共卫生学院提供。1.4动物雄性昆明种小鼠18～22g，由中国药科大学动物中心提供。2方法与结果2.1分组造模及给药小鼠随机分成6组，每组12只，即正常对照组，模型组，脑复康组（0.4g/kg），开心散高剂量组（0.9g/kg）、中剂量组（0.3g/kg）、低剂量组（0.1g/kg）。每日灌胃1次，除正常对照组每日腹腔注射等容量无菌生理盐水外，其余各组每日腹腔注射3.75%D-gal150mg/kg，连续6周［2］。2.2学习记忆能力测试结果表明，D-半乳糖模型组小鼠记忆能力明显降低，表现为在水迷宫内反应错误次数与游抵平台的时间较正常对照组显著增加（P《0.01），阳性药脑复康组以及开心散高，中，低3个剂量都有明显的改善作用，而各用药组之间无显著性差异。结果见表1。表1开心散对D-半乳糖模型小鼠在水迷宫试验中学习记忆能力的影响(略)2.3脑、肝脏AGEs含量的测定行为学实验结束后第2天，摘取全脑、全肝，用无菌生理盐水制备10%的脑匀浆和肝匀浆，3000r/min离心10min，取上清液测定脑和肝脏的AGEs含量［3］，激发波长和发射波长分别采用340nm和430nm，荧光相对强度以任意荧光单位/毫克蛋白表示，结果表明，模型组小鼠脑、肝脏的AGEs含量显著升高，而开心散中、高剂量能够显著降低脑、肝脏AGEs含量的增加。结果见表2。表2开心散对D-半乳糖模型小鼠脑、肝脏AGEs含量的影响(略)2.4...