结核感染T细胞斑点试验在骨与关节结核诊断中的临床应用刘晓富【摘要】目的：观察结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）应用于骨结核与关节结核诊断的临床应用价值。方法：选取我院骨科病区于2012年2月至2014年7月期间收治的疑似骨结核与关节结核的患者127例，应用结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）与结核抗体（LAM-IgG）试验对患者进行诊断，比较两种诊断方法的特异度、灵敏度、阴性预测值（NPV）、阳性预测值（PPV）、阴性似然比（-LR）、阳性似然比（+LR）等指标的差异，探讨两种诊断方法在骨与关节结核诊断中的意义。结果：结核感染T细胞斑点试验灵敏度、特异度、NPV、PPV显著高于结核抗体试验（P＜0.05），结核感染T细胞斑点试验中-LR显著低于结核抗体诊断，差异具有统计学意义（P＜0.05），+LR明显高于结核抗体诊断。结论：结核感染T细胞斑点试验在对骨与关节结核的诊断中有较好的灵敏度与特异度，是骨关节结核重要辅助诊断指标。【关键词】骨与关节结核；结核感染T细胞斑点试验；结核抗体（LAM-IgG）试验；诊断结核的患病人数近年来仍不断增加，除引起肺部结核类疾病外，结核杆菌也可侵入全身其他器官，骨结核与关节结核即是较多见的肺外结核。骨结核与关节结核的临床表现早期缺乏特异性，经常发生误诊漏诊，导致患者错过最佳治疗时机延误病情，患者的健康受到严重损害甚至致残致畸[1]。为了寻找快速准确的骨结核与关节结核的早期诊断方法，我院特进行了结核感染T细胞斑点试验与结核抗体检测诊断的对比实验，以期为骨结核与关节结核的早期诊断提供理论依据。1资料与方法1.1一般资料选取我院骨科病区于2012年2月至2014年7月期间收治的疑似骨结核与关节结核的患者127例，其中男65例，女62例，年龄范围16～80岁，平均年龄（41.1±4.2）岁；所有患者入院主诉症状均为颈、胸背、腰背部疼痛及下肢活动受限、关节肿痛或活动受限等。入选病例中颈椎病变5例，胸椎病变19例，腰椎病变14例，耻骨联合病变4例，骶髂关节病变14例，髋关节病变12例，膝关节病变17例，踝关节病变9例，胸锁关节病变4例，肩关节病变2例，肘关节病变9例，腕关节病变16例，掌指关节病变2例。病程范围为3～44个月，平均病程（12.5±3.2）月。1.2检测方法详细询问既往病史、既往结核病史以及结核接触史，并行常规痰涂片结核杆菌检查和病变部位CT、MRI检查，所有入选患者均行T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）以及结核抗体（LAM-IgG）试验。1.2.1T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）检测方法抽取患者外周静脉血5ml，装入肝素抗凝管，采用密度梯度离心分离外周血中单个核细胞（PBMC）。在包被抗干扰素-γ（INF-γ）抗体的微量板四孔中加入4种不同对照物行比较分析：以植物血凝素作为阳性对照物，以AIM-V细胞培养液作为阴性对照物，另有结核杆菌特异混合多肽A（ESAT-6抗原）和结核杆菌特异混合多肽B（CFP-10抗原）。每孔中加入含250000个细胞的PBMC，然后将此微量板置于CO2含量为5%的培养箱中37°恒温培养16～20h，取出后以PBS液洗板4次，加入用碱性磷酸酶标记的抗γ干扰素抗体，以PBS洗脱，显色，并以PBS终止后可计算斑点数，测量孔点数是阳性结果的标准为测量孔点数高于阴性对照孔的2倍或测量孔点数比阴性对照孔多5个点。1.2.2结核抗体（LAM-IgG）试验检测方法抽取住院患者的空腹外周静脉血4ml行结核抗体（LAM-IgG）试验，检测试剂盒购自上海奥普生物医药有限公司，检测血清标本中38kd-IgG，全部操作严格按照说明书进行，LAM-IgG弱阳性即可判定为阳性。1.3骨结核与关节结核的诊断根据患者的结核接触史、临床表现、结核病原学检查以及CT、MRI图像，还要根据组织病理学诊断结果及患者抗痨治疗的反应做出综合判断。1.4评价指标试验的灵敏度、特异度、阴性预测值（NPV）、阳性预测值（PPV）、阴性似然比（-LR）、阳性似然比（+LR）可作为评价两种临床试验诊断效果的指标。1.5统计学方法用SPSS17.0统计软件进行数据的分析与处理，采用χ2检验对计数资料进行分析，用方差分析比较不同干预组各指标间的统计学差异。检验水准：α=0.05。2结果2.1诊断结果入选的127例患者中确诊为骨结核与关节结核的患者共102例，其余的25例后被确诊为脊柱肿...