海南几种大型绿藻18SrRNA基因的克隆与序列分析姜芳燕+黄海+杨宁+马军摘要对海南沿岸采集到的团集刚毛藻（Cladophoraglomerata）、细毛横丝藻（Acrochaeteleptochaete）、石莼（Ulvareticulata）和长茎葡萄蕨藻（Caulerpalentillifera）进行了形态学观察，采用18SrRNA通用引物，通过PCR技术，从这4种绿藻的基因组中扩增到各自的18SrRNA基因序列，并测序。与Genebank中已收录的6种绿藻18SrRNA基因序列进行比较分析，所得10种绿藻的18SrRNA基因長度为727bp，变异位点为266个，保守位点为453个。刚毛藻目与蕨藻目的遗传距离最大，为0.376；刚毛藻属内的种间遗传距离最小，为0.010。采用NJ法构建的系统进化树的拓扑结构显示：细毛横丝藻、葡枝横丝藻、石莼、礁膜、羽状尾孢藻和皱溪菜聚为一支；团集刚毛藻与扭曲刚毛藻单独聚为一支；长茎葡萄蕨藻与总状蕨藻聚为一支。说明18SrRNA序列可以作为大型绿藻系统发育研究的分子标记。关键词团集刚毛藻；细毛横丝藻；石莼；长茎葡萄蕨藻；18SrRNAQ75ADoi：10.12008/j.issn.1009-2196.2017.06.011CloningandSequenceAnalysisof18SrRNAGenesofSeveralLargeGreenAlgaeinHainanProvinceJIANGFangyan1）HUANGHai1）YANGning2）MAJun1）（1HainanKeyLaboratoryofTropicalMarineFisheryResourcesProtectionandUtilization，HainanTropicalOceanUniversity，Sanya，Hainan572022；2SanyaScience&TechnologyAcademyofWinterBreedingandMultiplication，Sanya，Hainan572000）AbstractLargegreenalgaeCladophoraglomerata，Acrochaeteleptochaete，Ulvareticulata，andCaulerpalentilliferacollectedfromthecoastofHainanprovincewereobservedmorphologically.With18SrRNAasuniversalprimer，thegenesfromthese4largegreenalgaewereamplifiedto18SrRNAgenesequencebyPCR.Acomparativeanalysiswasmadeof18SrRNAgenesequencesamongthe4greenalgaeselectedandthe6greenalgaefromtheGenebank.Theresultsshowedthatthe18SrRNAgenesequencesofthese10greenalgaewere727bpinlengthwith266variablesitesand453conservedsites.ThemaximumgeneticdistancebetweenCladophralesandCodialeswas0.376.ThegeneticdistanceamongthespeciesofgenusCladophorawas0.010，theshortest.ThetopologyofphylogenetictreeconstructedbyNJmethodsuggestedthatA.leptochaete，A.repens，U.reticulata，M.nitidum，U.penicilliformis，andP.crispawereclusteredintoonegroup；C.glomerataandC.coelothrixwereintoanothergroup；C.lentilliferaandC.racemosaintoanothergroup.Thisindicatedthat18SrRNAsequencecouldbeusedasamolecularmarkerforphylogeneticresearchoflargegreenalgae.KeywordsCladophoraglomerata；Acrochaeteleptochaete；Ulvareticulata；Caulerpalentillifera；18SrRNA.大型海藻是一类重要的海洋生物资源，是海洋生态系统的重要组成部分，在海洋生态系统物质循环和维持海洋生态平衡中发挥着重要作用[1]。丁兰平等[2]在对中国南海多个地区开展野外调查的基础上，通过研究与历史资料整理发现，中国目前绿藻门海藻共计有11目21科48属211个种及变种，其中南海绿藻门有9目16科41属180种及变种、变型，其绿藻多样性占全国的85.31%，表明南海是中国绿藻多样性最丰富的地区。由于生长环境的不同，大型绿藻的藻体形态及结构存在着广泛的变异，因此，单从传统的形态学特征对其进行系统分类有一定的局限性。尤其是石莼目（Ulvales）礁膜科（Monostromaceae）的礁膜属（Monostroma）、石莼科（Ulvaceae）的石莼属（Ulva）和浒苔属（Enteromorpha）3个属[3]，相关的物种分类一直存在诸多观点[4]。20世纪90年代以来，随着分子生物学技术的迅速发展，分子标记技术被广泛应用于海洋藻类的分子鉴定和分子进化研究[5]。杨君等[6]采用RAPD技术对浒苔属藻类进行了初步的分子系统学研究，结果表明，缘管浒苔（Enteromorphalinza）与石莼属有较近的亲缘关系，应深入探究其分类地位。沈颂东和张劲[4]通过对绿藻5.8SrRNA基因序列扩增及系统发育分析，表明相对于浒苔属的其他物种，浒苔与孔石...