814CentralSouthPharmacy.August2014,Vol.12No.8中南药学2014年8月第12卷第8期高效液相色谱测定依达拉奉中苯肼残留方法的优化李帅1，廖彬2*（1.湖南省食品药品检验研究院，长沙410001；2.湖南药用辅料检验检测中心，长沙410014）摘要：目的优化HPLC测定依达拉奉中苯肼残留的方法。方法采用HPLC法，以InertsilC18（150mm×4.6mm，5μm）为色谱柱，以0.05mol•L－1磷酸二氢铵溶液（用磷酸调pH至3.5）-甲醇（65：35）为流动相，流速为1.0mL•min－1，柱温30℃，检测波长为226nm，进样量为20μL，以0.05mol•L－1磷酸二氢铵溶液-甲醇（65：35）（用磷酸调pH至2.0）作为溶剂。结果苯肼在0.17～0.68μg•mL－1与峰面积线性关系良好（r＝0.9999，n＝6），平均回收率＞95%（n＝3），苯肼溶液在12h内稳定，最低检测限为0.34ng。结论本测定方法可靠、简便、结果准确、稳定性好，适于该制剂中苯肼残留的测定。关键词：苯肼；高效液相色谱法；依达拉奉：R917文献标识码：A：1672-2981(2014)08-0814-03doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2014.08.027OptimizationofHPLCdeterminationofphenylhydrazineresiduesinedaravoneLIShuai1,LIAOBin2*(1.HunanInstituteforFoodandDrugControl,Changsha410001;2.HunanPharmaceuticalExcipientsTestingandInspectionCenter,Changsha410014)Abstract:ObjectiveToestablishanHPLCmethodtodeterminephenylhydrazineresiduesinedaravone.MethodsTheingredientwasseparatedonanInertsilC18(150mm×4.6mm,5μm)column.Themobilephasewas0.05mol•L－1ammoniumacetate(adjustedpHto3.5byphosphoricacid)-methanol(65：35).Theflowratewas1.0mL•min－1.Thecolumntemperaturewasmaintainedat30℃,thedetectionwavelengthwas226nm,theinjectionvol-umewas20μL.Ammoniumacetate(0.05mol•L－1)-methanol(65：35)(adjustedpHto2.0byphosphoricacid)wasusedasthesolvent.ResultsThelinearityofphenylhydrazinewasat0.17－0.68μg•mL－1(r＝0.9999,n＝6),theaveragerecoverywasmorethan95%(n＝3),thetestsolutionwasstablein12h,andthedetectionlimitwas0.34ng.ConclusionThismethodissimple,reliable,accurate,stable,andissuitableforthedeterminationofphenylhydrazineresiduesinedaravone.Keywords:phenylhydrazine;HPLC;edaravone苯肼是一种有机剧毒品，可致溶血性贫血，并可对肝脏造成严重损害[1-2]。苯肼是合成依达拉奉所必需的原料[3-4]，若生产过程中出现疏漏可能导致苯肼的残留。由于依达拉奉一般制成注射液供临床使用，苯肼的残留可能造成严重不良反应，因此有必要对其进行严格的控制。目前测定残留苯肼的报道主要有阻抑动力学荧光分析法[5]、气相色谱法[6-7]与HPLC法[8]3种。经笔者考察发现荧光分析法操作繁琐、专属性差；气相色谱法灵敏度低，重现性差；而文献报道中HPLC虽专属性较高、操作简便，但溶液稳定性差，对照品溶液在1h内降解17.1%。故目前3种测定方法均不能完全满足残留量苯肼的测定，因此笔者对残留量苯肼的测定方法进行了摸索与改进，建立稳定可行的方法。1仪器与试药1.1仪器LC20AT高效液相色谱仪、LC-Solution色谱工作站、UV2550紫外分光光度仪（日本岛津）；XP205电子分析天平（瑞士梅特勒公司，精度：0.01mg）。1.2试药苯肼（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20101126；纯度≥98%）；磷酸二氢铵、磷酸为分析纯试剂；甲醇为色谱纯；水为去离子水；依达拉奉（湖南五洲通药业有限公司，批号：121009、121012、121015，纯度均＞99.0%）。2溶液稳定性考察苯肼为还原性物质，接触空气或氧化物后易氧化分解为酚类、醌类及苯胺等物质；同时苯肼水溶液显弱碱性，遇酸生成相应盐类。故从苯肼化学性质入手，考察其在不同溶剂、添加抗氧剂、不同pH等环境下的稳定性，优选适宜的溶剂。2.1苯肼在不同溶剂中的稳定性取苯肼，分别用水-甲醇（65：35）与纯甲醇溶解稀释制成4μg•mL－1的溶液，立即置紫外分光光度仪中并分别在最大吸收波长处226与233nm的测定。结果苯肼在2种溶液中吸光度在1h内分别从0.2982与0.3150降至0.1592与0.2610，各降解了46.6%与17.1%（...