非创伤性预处理对大鼠缺血心肌保护效应机制的探讨［摘要］目的：探讨非创伤性下肢缺血预处理对大鼠心肌保护效应的机制。方法：用雄性SD大鼠36只，分对照、缺血再灌注、经典缺血预处理及非创伤性下肢缺血预处理4组。分别观察以下指标：血浆一氧化氮(NO)水平；心肌热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达；心肌5'-核苷酸酶(5'-NT)及过氧化氢酶(CAT)活性。结果：经典及非创伤性下肢缺血预处理后，血浆NO水平显著高于缺血再灌注组和对照组(P＜0.01)，心肌HSP70mRNA表达明显增强，心肌5'-NT、CAT活性升高(P＜0.05，vsI/R)，而经典及非创伤性下肢缺血预处理两组间上述指标无显著差异(P＞0.05)。结论：非创伤性下肢缺血预处理保护心肌的机制可能与经典缺血预处理相似，均是通过提高心肌内源性保护物质NO、HSP70mRNA、CAT及5'-NT显示预处理效应。［主题词］大鼠；局部缺血；再灌注［中分类号］Q463［文献标识码］A［文章编号］1000-4718(2000)09-0835-04Studyonprotectivemechanismofnon-woundedischemicpreconditioningonratischemia/reperfusionmyocardiumLUYan-zhen(DepartmentofPathophysiology,ChangzhiMedicalCollege,Changzhi046000，China)DONGChuan-ren,LIUYong-ming,ZHANGYou-yun,MAChun-yan(DepartmentofPathophysiology,HubeiMedicalUniversity,Wuhan430071,China)［Abstract］AIM:Toinvestigateprobableprotectivemechanismofnon-woundedlegsischemicpreconditioningonischemia/reperfusion(I/R)myocardium.METHODS:36maleSDrats,weighting(250±30)g,weredividedinto4groups.Theyarenormalcontrol(NC);I/R;classicalischemicpreconditioning(C-IPC)andnon-woundedlegsischemicpreconditioning(N-WIPC).NOinplasm,expressionofmyocardialHSP70mRNA,theactivitiesof5'-NTandCATofmyocardiumwereobservedinallgroups.RESULTS:ThelevelofNOinplasmsignificantlyenhancedingroupsC-IPCandN-WIPCcomparedwiththatingroupsI/RandNC(P＜0.01),expressionofmyocardialHSP70mRNAwasgreatlyincreasedinbothC-IPCandN-WIPCgroups,theactivitiesof5'-NT,CATofmyocardiumwerealsoraisedingroupsC-IPCandN-WIPC(P＜0.05vsI/R),buttherewasnodifferencebetweenC-IPCandN-WIPC(P＞0.05).CONCLUSION:ThepossibleprotectivemechanisminvolvedinN-WIPCissimilartothatinC-IPC,whichisduetoincreaseofendogenousmyocardialprotectivesubstances.［MeSH］Rats;Ischemia;Reperfusion本室已证实，无论是非创伤性下肢缺血预处理或是经典心脏缺血预处理，均可获得明显缩小心肌梗塞范围，改善心脏功能，减轻心肌脂质过氧化反应及心肌酶漏出等预处理效应。本实验通过监测大鼠血浆一氧化氮(nitricoxide)含量，心肌5'-核苷酸酶(5'-nucleotidase)及过氧化氢酶(catalase)活性和热休克蛋白70(HSP70)mRNA表达的变化，旨在为探讨这两种预处理方式的机制提供实验资料。材料和方法一、动物模型复制与分组雄性SD大鼠，体重(250±30)g，用20％乌拉坦(1g*kg-1ip)麻醉。气管插管人工机械通气。胸骨左缘第四肋间开胸，剪开心包，3～0丝线环左冠脉前降支距左心耳下缘2mm处穿过。稳定后，取心电正常者随机分4组：(1)正常对照(NC)组,n=9,留线不结扎冠脉旷置50及120min;(2)缺血再灌(I/R)组,n=9,结扎左冠脉前降支阻断血流30min,再灌注20及90min;(3)经典缺血预处理(C-IPC)组,n=9,按经典Murry法复制，即结扎冠脉前降支5min,再灌注5min,反复4次。以后处理同I/R组;(4)非创伤性下肢缺血预处理(N-WIPC)组,n=9,麻醉后，以止血带捆绑双下肢至股动脉搏动不能触及，阻断血流5min后松开5min，反复4次。以后处理同I/R组。二、主要试剂NO试剂盒为南京聚力生物医学工程所产品；质粒DNA由上海第二军医大学宋亮年教授惠赠；Random标记盒购自Promega公司；DAB及5'-NT分别为sigma和中科院上海生物化学研究所产品。三、观测指标(一)血浆NO含量测定各组于再灌注20min(NC组持续观察50min)，左颈总动脉取抗凝血液2mL，以2000×g离心10min，分离血浆，以NO测试盒测定，按说明操作。(二)心肌组织HSP70mRNA表达各组于再灌注90min(NC组持续120min)，速取左心室组织...