RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响作者：祁卫东蒋鹏程张恒马圭范钰【摘要】目的：探讨中期因子(midkine，MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：培养人胃癌BGC823、HGC27、MGC803及SGC7901细胞株，以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者。采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株，分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平，然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性，以Boyden方法检测癌细胞侵袭力。结果：4株胃癌细胞中，中期因子均有不同程度的表达，以胃癌BGC823细胞最高;以MKsiRNA转染胃癌BGC823细胞后，癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降，且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降，细胞侵袭力明显下降。结论：中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞，可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力。【关键词】胃癌;中期因子;RNA干扰;黏附;侵袭[Abstract]Objective:Tostudytheeffectsofmidkine(MK)genesmallinterferingRNA(siRNA)onadhesionandinvasionofhumangastriccancercell.Methods:RealtimePCRwasusedtoevaluatetheMKmRNAexpressionofhumangastriccancercelllinesBGC823,HGC27,MGC803andSGC7901.ThecellofMKhighestexpressionwastransfectedwithdifferentdoseofMKsiRNA.TheexpressionofMKmRNAandproteinwereweredeterminedbyrealtimequantitativePCRandimmumoflurescencemethod.ThecelladhesionwasevaluatedbyMTTassay,andinvasionwasexminedbyBoydenchamber,respectively.Results:CelllineBGC823showedthehighestelevationofMKmRNAinfourgastriccancercelllines.TheresultsfromrealtimequantitativePCRandimmumoflurescencemethodshowedthatMKmRNAandproteinreducedintimeanddosedependentmanners(P《0.01;P《0.01).Theadhesive,andinvasiveabilityofBGC823celltreatedwithMKsiRNAdecreasedcomparedwithcontrolgroups(P《0.01,P《0.01).Conclusion:MKgenemightplayanimportantroleinadhesionandinvasionofhumangastriccancercell.siRNAtargetedMKcouldeffectivelyinhibitadhesion,migration,andinvasionofhumangastriccancercell.[Keywords]gastriccarcinoma;midkine;RNAinterference;adhesion;invasion---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---尽管胃癌的诊断和治疗已经有了长足的进步，但进展期胃癌的预后依然很差，5年生存率徘徊在20%～30%。己经证实，胃癌的发生发展是多基因改变的结果。胃癌中特殊基因的表达异常在不同的细胞功能中发挥了重要作用，如细胞黏附、信号传导、细胞分化、细胞增殖及转移。更好地了解胃癌发生发展的分子机制将有利于胃癌的诊治及预防。许多研究表明生长因子不仅促进组织细胞的增殖，而且能诱导组织细胞的恶性转化，在肿瘤的发展中发挥了重要的角色。中期因子(midkine，MK)基因是1988年Muramatsu等[1]在视黄酸诱导的小鼠胚胎肿瘤细胞系HM1细胞cDNA文库中发现的一种新基因，其后，在多种动物和人类中均已发现了中期因子基因。中期因子和另一种相似的细胞因子——多效生长因子(pleiotrophin，PTN)一起归为一类新的肝素结合因子家族(heparinbindingfactorfamily)[1]。研究发现，中期因子在许多肿瘤如食管癌、结肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、肺癌等多种癌细胞和组织中过表达，而在正常组织中表达很低或不表达[2-7]。因此，中期因子有可能作为肿瘤标志物在肿瘤的诊断、预后和治疗中发挥作用。目前，关于中期因子与胃癌的关系研究较少。本研究以胃癌细胞为模型，以小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)介导的RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术下调癌细胞中期因子表达，旨在探讨中期因子基因在人胃癌细胞黏附、侵袭中的可能作用。1材料和方法1.1材料人胃癌BGC823、HGC27、MGC803及SGC7901细胞株，由本院组织细胞生物库冻存。MKsiRNA正义链序列：5′AGGACUAGACGCCAAGCCUTT3′，由美国Dharmacon公司合成。RPMI1640购自Gibco...