瘢痕组织中胶原蛋白提取及纯化研究朱伟东王富生王志远摘要：目的优化实验条件，建立提取瘢痕胶原蛋白的可靠方法。方法选择2015年1月～2016年12月本院20例手术整形切除增生性瘢痕的标本进行研究，用胃蛋白酶的消化方式、用盐酸溶解法提取瘢痕胶原，用氯化钠盐析法制成胶原蛋白膜，用吸收光谱分析、氨基酸成分分析对胶原蛋白进行鉴定。结果20例胶原标本提取胶原蛋白，通过氨基酸成分分析甘氨酸占30%以上，吸收光谱分析在230nm处有吸收波峰，证实提取物为来自皮肤瘢痕组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白。结论用酶消化、酸溶解、盐析法提取瘢痕胶原蛋白，方法可靠，操作简单，提取胶原蛋白纯度高，符合Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白特征，制成胶原蛋白膜为进一步研究瘢痕提供了生物学模型。关键词：增生性瘢痕；胶原蛋白；胶原提取；胶原膜：R622：ADOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.17.025：1006-1959（2018）17-0084-03Abstract：ObjectiveTooptimizeexperimentalconditionsandestablishareliablemethodforextractingscarcollagen.MethodsFromJanuary2015toDecember2016，20specimensofsurgicallyresectedhypertrophicscarswereselectedfromthehospital.Pepsindigestionmethodwasusedtoextractscarcollagenbyhydrochloricaciddissolutionmethod，andcollagenwaspreparedbysodiumchloridesaltingoutmethod.Theproteinfilmwasidentifiedbyabsorptionspectroscopyandaminoacidcompositionanalysis.ResultsCollagenwasextractedfrom20collagensamples，andglycineaccountedformorethan30%byaminoacidcomposition.Absorptionpeakswereobservedat230nmbyabsorptionspectrumanalysis，andtheextractswereconfirmedtobecollagenIandIIIfromskinscartissue.ConclusionThescarcollagenwasextractedbyenzymedigestion，aciddissolutionandsaltingout.Themethodwasreliable，simple，andthepurityofcollagenextractionwashigh，whichwasconsistentwiththecharacteristicsoftypeⅠandⅢcollagen.Thepreparationofcollagenmembraneprovidesabiologicalmodelforthefurtherstudyofscar.Keywords：Hypertrophicscar；Collagen；Collagenextraction；Collagenmembrane增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是皮肤创伤修复过程中胶原过度增生所致，这个过程并不随创面修复而停止，其发生受全身及局部多种因素影响，从瘢痕组织中提取胶原蛋白，进行相关生物化学研究和分子学研究是进行有关瘢痕发生、发展及转归的生物学模型，本课题旨在探索从瘢痕组织中提取纯的胶原蛋白，为后期进一步研究提供生物学模型。我院开展在实验室条件下提取增生性瘢痕中提取胶原蛋白，并同时探索胶原蛋白成膜技术，现报道如下。1资料与方法1.1一般資料选取2015年1月～2016年12月深圳市龙岗区第二人民医院烧伤整形外科增生性瘢痕组织来自于门诊和住院患者20例，所取瘢痕组织为手术整形切除组织，标本取材前向患者说明目的并征得同意。男性14例，女性6例，年龄8～38岁，平均年龄（22.45±5.65）岁，病程6个月～20年，平均病程（2.47±7.85）年；瘢痕组织来自烧伤瘢痕15例，外伤瘢痕3例，感染瘢痕2例；取材部位：面部5例，颈部2例，耳2例，前胸3例，会阴1例，四肢7例。1.2方法标本处理：切去瘢痕组织放置在无菌袋中，4℃冰箱保存，术后修剪切除瘢痕组织，剪除残留表皮组织，毛囊等皮肤附属组织，切除皮下脂肪组织备用。用电子天平称40g瘢痕组织，用剪刀修成0.1mm×0.1mm微粒组织，放入搅拌机加入蒸馏水100ml搅拌粉碎5min，离心机离心4min，弃去上清液，沉淀物放八锥形烧瓶内，加入用10倍体积的40ml/L盐酸（pH7.5，0.05mol/LTris-HC1配制）混悬后，放置在4℃冰箱中24h，定期摇晃，用盐酸除去胶原杂质。离心机离心：4000s速离心10min，分离得到上清液（S1）和沉淀。沉淀用Tris·HCI缓冲液和0.5mol/L乙酸充分洗涤后，24h后弃上清液，沉淀用Tris·HCI缓冲液和0.5mol/L乙酸充分洗涤后，用5倍体积的胃蛋白酶消化液（0.5mol/L乙酸配成1g/L）混悬，分成2份。其中1份离心机4000r/min速下离心10min，收集上清液，沉淀加4倍体积的胃蛋白酶消化液重复酶解1次，离心，取上清液，再搅...