内科学(肾病)专业毕业论文[精品论文]雷公藤甲素干预白细胞介素13诱导足细胞损伤的作用研究关键词：肾病足细胞雷公藤甲素蛋白尿白细胞介素摘要：足细胞是微小病变肾病(MCD)和局灶节段肾小球硬化(FSGS)肾组织病变形成的主要受损靶细胞。许多研究表明，T细胞功能异常，Th2细胞产生的细胞因子(IL-4，IL-13等)在FSGS和MCD病变的发生发展中起了重要的作用。另有研究发现，FSGS病人血清白细胞介素13(IL-13)水平较正常人升高。因此，IL-13对足细胞的直接作用可能是FSGS的发病机制之一。本研究检测体外培养的足细胞上IL-13受体的表达，观察IL-13对足细胞的直接损伤作用，并初步探讨了其作用机制。目前，FSGS的治疗首选药物依然是糖皮质激素，但其完全缓解率尚不足30％。而在治疗中力求使蛋白尿在短时间内达到缓解可明显改善患者的预后。雷公藤甲素用于肾小球疾病的治疗已有30多年的历史，在FSGS的治疗中有着积极的意义。前期的研究也发现雷公藤甲素对嘌呤霉素(puromycinaminonucleoside，PA)诱导的足细胞损伤存在保护作用。既然IL-13诱导的足细胞损伤是FSGS可能的发病机制之一，因此，我们继续探讨了雷公藤甲素在体外IL-13诱导的足细胞损伤中的保护作用。本研究由两部分组成第一部分：IL-13诱导足细胞损伤及其作用机制的研究目的：足细胞是MCD和FSGS肾组织病变形成的主要受损靶细胞。许多研究表明，T细胞功能异常，Th2细胞产生的细胞因子(IL-4，IL-13等)在FSGS和MCD病变的发生发展中起了重要的作用。为探讨Th2细胞因子IL-13是否直接介导足细胞损伤，我们使用温度敏感的小鼠足细胞系(heatsensitivemousepodocyte，HSMP)，检测足细胞上IL-13受体的表达，观察IL-13对足细胞的直接损伤作用，并初步探讨了其作用机制。方法：RT-PCR和免疫组化方法检测HSMP上IL-13受体的mRNA和蛋白质表达。使用不同浓度(10ng/ml，50ng/ml，100ng/ml)的IL-13干预足细胞不同时间(8h，12h，24h)，免疫荧光法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和细胞间连接蛋白ZO-1的变化情况。并进一步应用Westernblot方法检测细胞内信号通路STAT6的磷酸化水平，探讨IL-13损伤足细胞的作用机制。结果：HSMP上存在IL-13Ⅰ型受体的mRNA和蛋白质表达。骨架蛋白F-actin和ZO-1的染色结果显示：IL-13可呈剂量和时间依赖性对足细胞造成损伤。50ng/mlIL-13作用24小时即可造成足细胞明显损伤。F-actin变细、紊乱，向细胞边缘聚集：ZO-1明显减弱和断裂。进一步的研究还表明，IL-13可诱导足细胞内细胞因子相关的STAT6信号通路的活化。STAT6信号通路特异性抑制剂leflunomide可阻断IL-13对足细胞骨架蛋白结构和细胞间连接蛋白的影响。结论：足细胞表面存在IL-13受体，IL-13可通过与其受体结合损伤足细胞的骨架结构和细胞间连接蛋白。IL-13对足细胞的损伤作用与STAT6信号通路的活化有关。第二部分：雷公藤甲素干预IL-13诱导的足细胞损伤的作用研究目的：目前，FSGS的治疗首选药物依然是糖皮质激素，但其完全缓解率尚不足30％。。雷公藤甲素用于肾小球疾病的治疗已有30多年的历史，在FSGS的治疗中有着积极的意义，小剂量激素联合雷公藤甲素可明显提高完全缓解率和缩短完全缓解时间。前期的研究也发现雷公藤甲素对嘌呤霉素(puromycinaminonucleoside，PA)诱导的足细胞损伤存在保护作用。研究-提示IL-13介导的足细胞损伤可能是FSGS发病的相关机制之一。本研究使用HSMPs，用IL-13诱导足细胞损伤模型，观察雷公藤甲素对足细胞的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法：使用不同浓度(1ng/ml，3ng/ml，10ng/ml)的雷公藤甲素预处理细胞30分钟后，加入IL-13(50ng/ml)诱导足细胞损伤，免疫荧光法分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和细胞间连接蛋白ZO-1的变化情况。并进一步应用Westernblotting方法检测细胞内信号通路STAT6的磷酸化水平，探讨雷公藤甲素干预IL-13诱导足细胞作用的机制。选用地塞米松(1μM)作为药物对照。结果：雷公藤甲素对IL-13诱导的足细胞损伤有明显的保护作用，其作用与地塞米松相似。骨架蛋白F-actin的染色结果显示：3ng/ml及10ng/ml的雷公藤甲素可明显阻断IL-13诱导的F-actin的损伤，F-actin的表达得以部分恢复，细胞骨架重排；1μM的地塞米松可...