痤疮丙酸杆菌促进小鼠外周血中树突状细胞（DC）的动员在体外对胃癌细胞的作用（河北省沧州市屮西医结合医院河北沧州061000）【摘要】目的：探讨痤疮丙酸杆菌促进小鼠外周血屮树突状细胞（DC）的动员在体外对胃癌细胞的作用。方法：C578Bl7L6j（B6）小鼠注射痤疮丙酸杆菌后分离外周单核细胞，予以流式细胞仪将F4/80-B220-CD11C+细胞，体外加入TNF-alpha;>IL-4、GM-CSF等细胞因子培养，由混合淋巴细胞反应、表型分析、形态学观察鉴定其能否分化为成熟DC;将痤疮丙酸杆菌动员的树突状细胞负载H癌抗原后致敏细胞，观察体外T细胞活化后对H癌细胞的杀伤效应。结果：实验组注射痤疮丙酸杆菌后lh、6h、Id、2d、3d、5d、7d后小鼠外周血屮F4/80-B220-CDC+细胞变化显著高于对照组，差异有统计学意义（P《0.05），实验组第Id后显著升高，第3天达高峰后逐渐降低；H癌细胞与B16细胞相比，痤疮丙酸杆菌动贝的DC活化的T细胞及骨髓來源的DC活化的T细胞屮IFN-gamma;干扰素的分泌水平差异有统计学意义（P《0.05）。结论：痤疮丙酸杆菌可对F4/80-B220-CD11C+细胞迅速动仍进入小鼠外周血，细胞因子诱导后口J分化为成熟的树突状细胞，体外诱导特异性T淋巴细胞系伤胃癌细胞，同时合并分泌大量INF-gamma;。【关键词】实验研究；胃癌；树突状细胞；痤疮丙酸杆菌【】R735.2【文献标识码】B【】1003-5028（2015）7-0230-02胃癌在我国各种恶性肿瘤屮居首位，胃癌除进行化疗及手术外，近年來认为对胃癌患者进行肿瘤免疫治疗临床效果较佳，而其屮主要为痤疮丙酸杆菌动员外周血屮的树突状细胞，对肿瘤细胞产生系伤效应，效果确切［1-2］。探析痤疮丙酸杆菌促进小鼠外周血屮树突状细胞的动贝效应具有重要的临床价值，故本研究探究痤疮丙酸杆菌（p.acnes）促进小鼠外周血屮树突状细胞（DC）的动员在---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---体外对胃癌细胞的作用，效果满意，现报道如下。1资料和方法1.1实验动物中科院实验动物中心上海分中心提供8-10周龄的雌性BALB/c小鼠及C578BL/6J(B6)鼠。1.2主要实验仪器及试剂美国BD公司提供的鼠TNF-alpha;、IL-4、GM-CSF、重组鼠干细胞因子(SCF),中科院上海细胞所提供的黑色素瘤B16细胞株及胃癌细胞株SCG-7901,美国Pharmigen公司生产的PE标记的抗la、CD8alpha;NCD86单抗、FITC标i己的抗CDllb、CD80、F4/80、CD40单抗，FITC标记的羊抗鼠IgG二抗，鼠DEC-205单抗，异硫氰酸荧光素标记的CDlc单抗，藻红元荧光素(PE)标记的B220单抗，生物素标记的Cy-chrome-conjugatedstreptavidin二抗及F4/80单抗;德国Miltenyi公司生产的结合鼠CD3单抗的免疫磁珠，美国Endogen公司生产的鼠gamma;干扰素ELISA检测试剂盒。1.2实验方法1)分离小鼠外周血F4/80-B220-CD11C+细胞:B6小鼠分为八组，每组5只；实验组将火活的痤疮丙酸杆菌(lmg/100mu;IPBS)由尾静脉注射，对照组予以PBS100mu;l注射，在注射前、注射lh、1、2、3、5、7d后小鼠后心脏予以乙醚麻醉，穿刺采集0.8ml外周血，肝素抗凝，外周血单个核心板予以密度梯度离心法分离，细胞标记后由流式细胞仪进行F4/80-B220-CD11C+细胞分离，纯度超过99%;2)观察及表型分析F4/80-B220-CD1C+细胞的形态学：选择注射痤疮丙酸杆菌24h后分选的F4/80-B220-CD1C+细胞，在24孔培养板上接种，加入10ng/mllL-4及4ng/mlGM-CSF,培养五天后更换新培养板，后用50ng/mlTNF-alpha;及4ng/mlGM-CSF培养五天；培养吋每隔2日予以培养基半量换液，用非特异性酯酶和Giemsa染色后光镜下观察；取分选的F4/80-B220-CD1C+细胞，标记后予以流式细胞仪检测共刺激分子DEC205、CD86、CD80及MHC-II。3)混合淋巴细胞反应(MLR):采集BALB/c小鼠脾脏细胞，应用密度梯度离心法分离MNCs,将结合鼠CD3单抗的磁珠加入后分选，注射痤疮丙酸杆菌24h后的F4/80-B220-CD11C+细胞，将细胞因子及丝裂霉素C(MMC)做---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---相M处理后备用。将刺激细胞及反应T细胞加入96孔板，同吋设置单一细胞对照。培养五天后每孔加入MTT继续培养4h离心后除去上清液，加入异丙醇55nm酶标仪检测0D值;4)T效应细胞的...