地中海贫血的诊断技术及其发展【摘要】地中海贫血是一种常隐性遗传病，为世界常见的遗传病之一。世界上约有4.83%的人口携带珠蛋白变异基因[1]，因而地中海贫血的诊断与预防就显得尤为重要。常用的诊断方法有生化筛查和基因诊断等，这两种方法都已取得不错的进展，在地贫筛查和产前诊断上取得了很大的成效。【关键词】地中海贫血；诊断；发展地中海贫血是由于编码珠蛋白的α或β类珠蛋白基因发生缺失或点突变，使α或β类珠蛋白链缺如或不足所致的贫血。临床表现为溶血性贫血，根据受累珠蛋白基因不同，地中海贫血可分为α、β、δβ、δ等类型，临床常见为α-地中海贫血和β-地中海贫血两种。对于这两种贫血的诊断，在几代人的努力下，在准确性、可行性和普及性等方面已经取得了很大的进展。1、地中海贫血的生化筛查1.1红细胞参数用于地中海贫血筛查的红细胞参数包括RBC、Hb、MCV、MCH、MCHC、RDW和红细胞形态等。红细胞参数的检测分析也是诊断地中海贫血最基本的试验。地中海贫血最重要的血液学指标是血红蛋白含量、红细胞计数和红细胞比容。若平均红细胞体积MCV＜80fl、平均红细胞血红蛋白含量MCH＜27pg，提示其可能是地贫杂合子[2]。但需要注意的是儿童MCV随年龄而呈现动态变化[3]。RBC也可以作为地中海贫血筛查的指标，对于杂合子地贫，常表现为MCV、MCH减低同时有RBC的增加，RBC常大于5.0×1012/L。RDW和外周血涂片红细胞形态观察也可以作为辅助指标。这一检测方法简便、迅速，也较为普及。但不足之处就是不能有效地把缺铁性贫血区别开来，对于α-地中海贫血和β-地中海贫血的诊断也没有特异性。故此法还需除外其他可能引起此性状的病或是结合其它诊断方法。1.2红细胞渗透脆性试验地中海贫血患者的红细胞膜存在形态、生化、代谢异常，因而在低渗溶液中，当水渗透其内部达一定程度时，红细胞发生膨胀破裂，地中海贫血患者的渗透脆性降低[4]。该试验是地中海贫血群体筛查最简便的方法。1.3血红蛋白组分分析血红蛋白组分分析是地贫诊断不可缺少的检查项目[5]，由于此病是血红蛋白病，故相对于以上几种方法要可靠。电泳是临床上最常用的血红蛋白分析技术，主要有醋酸纤维素薄膜电泳、毛细管电泳和琼脂糖凝胶电泳等。由于各种Hb在pH8.5的缓冲液中均带负电荷且等电点不同，电泳速度不同，故而在电泳图谱上呈现不同区带位置，通过比较各区带染色的强度来计算HbA、HbA2、HbF的含量从而对Hb进行筛查。此外高效液相色谱法（HPLC）也可以用于血红蛋白的检测。由于其具有可用全血标本、标本量少、标本无需处理、操作简单、敏感性高等优点，在HbA2和HbF的测定上具有一定得优势。HPLC也可与CE技术合用进行血红蛋白分析，通过二者的互补作用，为地贫的诊断提取更有价值的数据，以便进行结果分析。此外还可进行HbF定量检测、HbA2检测、不稳定血红蛋白检测、抗碱血红蛋白检测、肽链分析、直接免疫细胞化学法检测红细胞血红蛋白含量等。MCV、红细胞渗透脆性试验及Hb电泳3项平行联合检测的灵敏度及特异度分别达100.0%、79.7%，平行联合检测的灵敏度及各单位检测灵敏度之间差异有统计学意义，是地中海贫血诊断及其产前筛查中最理想的试验方法[6]。2、地中海贫血的基因诊断2.1α-地中海贫血的基因诊断α-地中海贫血多由基因缺失所引起。（1）gap-PCR：对于常见的已知缺失型突变，可使用gap-PCR进行快速诊断。通过设计两对引物，其中一对引物位于缺失区域的两侧，扩增缺失基因，观察两对引物有无扩增条带的组合，来区分正常、纯合子和杂合子。gap-PCR快速、简单、无放射性，可以检测缺失和重排，是目前诊断缺失型地贫的常规方法。（2）Southern杂交技术：对于断点序列尚未明确的缺失型α-地中海贫血，需采用ξ和α基因探针，用Southern杂交技术检测。Southern杂交方法主要用于较大片段缺失造成的缺失型地中海贫血，在很长一段时间曾是α-地中海贫血基因诊断和产前诊断的最主要方法[7]。(3)反向点杂交法（RDB）：对于点突变型α-地中海贫血可以采用此方法。RDB主要特点是多种等位基因特异性寡核苷酸同时参与检测样品DNA又不互相干扰，在一次实验同时可辨别多种点突变，且RDB的靶序列可通过PCR扩增获得...