【作者简介】：陈代武(1968-),男,副教授，研究方向:生命科学中的新分析方法槲皮素与荧光活性氨基酸的相互作用研究陈代武（邵阳医学高等专科学校药学系，湖南邵阳，422000）摘要：采用荧光光谱法，研究荧光活性物质槲皮素（Qct）与色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）的相互作用。在pH7.4的磷酸缓冲溶液（PBS）中，测得不同温度下的反应平衡常数（K）和结合摩尔比（n），槲皮素与氨基酸间有较强的结合作用，求出了结合的热力学常数。关键词：槲皮素；氨基酸；荧光法研究分子间相互作用中图分类号：O655文献标识码：AFluorescentStudiesontheInteractionsofQuercetinwithAminophenolCHENDai-wu（DepartmentofPharmaceuticalandShaoyangmedicalcollege,Shaoyang,Hunan422000）AbstractTostudytheinteractionbetweenquercetin(Qct)withtryptophan（Try）Tyrosine,(Tyr)andphenylalanine(Phe)byFluorescencespectroscopy.In0.1molL-1phosphatebuffersolution(PBS,pH7.4),ThebindingconstantsKandbindingsitenatdifferenttemperatureweredetermined,TheinteractionbetweenQctandthreeaminophenolseemstobestrong.Keywordsquercetin(Qct);tryptophan(Try);Tyrosine(Tyr);phenylalanine(Phe);fluorescentstudiesonintermolecularinteractions氨基酸是在生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗体内具有特殊的生理功能，如果人体缺乏任何一种氨基酸，就可导致生理功能异常，影响抗体代谢的正常进行，最后导致疾病或引起代谢障碍同时也是生物体内不可缺少的营养成分之一。人体血液中存在一定量的氨基酸，且含量相当恒定。药物在血液中与蛋白质结合的同时，也可能与氨基酸发生作用，因此，研究药物与氨基酸的作用,不仅对研究药物分子与蛋白质的相互作用的本质具有指导作用，而且对了解药物的吸收和代谢颇具意义。槲皮素（Quercetin，简称Qct，图示1）是一种黄酮类天然抗氧化剂[1-2]，广泛存在于植物（含食用植物）中，其抑菌抗炎、防止血小板凝聚和防治心血管疾病及化学物质诱导肿瘤等药理作用正日益受到人们的关注[3-5]。生物医学中槲皮素与蛋白质作用的研究较多,而与具有荧光的氨基酸作用的未见文献报道，本文采用荧光分析法研究了荧光活性物质Qct与色氨酸（tryptophan,Try）、酪氨酸(Tyrosine,Tyr)及苯丙氨酸(phenylalanine,Phe)的作用，从Qct与游离的氨基酸分子和蛋白质分子中的氨基酸的作用比较，了解Qct与生物大分子作用的机理，为Qct在生命体系内药理作用的研究奠定一定实验基础,也为进一步研究蛋白质和有机小分子相互作用本质提供理论依据。1.实验部分1.1仪器和试剂F4500荧光分光光度计(Hitachi，日本)，Tu-1221紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司），pH-S3CpH计（上海雷磁仪器厂），SigmaPlot2.0科学绘图软件。Trp、Tyr、Phe和Qct（上海国药集团化学试剂有限公司），其他试剂为分析纯，0.1mol·L-1磷酸盐缓冲溶液为KH2PO4+Na2HPO4+0.1mol·L-1NaSO4(简称PBS，pH=7.4)，实验用水为Milli-Q超纯水。1.2实验方法取0.1mol·L-1PBS溶液3.0ml至1-cm荧光比色皿中，用微量注射器加样品液适量于比色皿中，配成不同浓度的溶液。每次测量前反应10min。Trp,Tyr和Phe的激发/发射波长分别为276/345±2，272/310±2和261/290±2nm，氨基酸测试的激发和发射光狭缝宽度均为5nm，光电倍增管PMT电压为700V。在290-550nm范围内记录荧光光谱。2.结果与讨论2.1三种氨基酸的荧光特性构成人体蛋白质的20余种氨基酸中，Trp、Tyr和Phe因分子结构中含有苯环和/或杂环而具有荧光，实验发现三种氨基酸的荧光强度随浓度的增加而增大，且在考察的浓度范围内，Trp、Tyr和Phe的荧光与浓度呈很好的线性关系，如图1所示，且R>0.99。从图中可看出，三种氨基酸的荧光强度为：Trp>Tyr>Phe.Scheme1StructureofquercetinFig.1therelationshipsoffluorescenceintensityofTrp,TyrandPheagainstconcentration(at22oC).c/10-6molL-102468101214FI0100200300400500600700TrpTyrPheFig.2Fluorescencespectraof5.00×10-6mol·L-1Trpwithdifferentconcentrationsofcoexistin...