EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞株SGC7910生物学行为的影响作者：李友琼，张雪怡，曾健陈巧林李良菊，成静，訾瑞峰，周天戟【摘要】目的：了解EB病毒BARF1基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响。方法：构建pSG5/BARF1真核表达载体，转染到EB病毒阴性的胃癌细胞系SGC7901，经RTPCR鉴定，获得BARF1稳定表达的细胞克隆。以pSG5空载体转染细胞为对照，进行细胞凋亡诱导实验、细胞增殖实验、软琼脂集落形成实验和细胞迁移实验。结果：与对照组相比，BARF1表达细胞组经抗癌药顺铂诱导后的细胞凋亡率显著降低（P《0.01），增殖速度显著加快（P《0.01），软琼脂集落形成率显著提高（P《0.05），细胞迁移能力显著增强（P《0.05）。结论：BARF1基因能够全面增强胃癌细胞的肿瘤原性，可能在EB病毒相关胃癌发生与演化的整个过程中起重要作用。【关键词】EB病毒；BARF1；胃癌细胞；细胞生物学行为［Abstract］Objective:ToinvestigatetheoncogenicfunctionsofEBVencodedBARF1geneingastricepithelialcells.Methods：ApSG5/BARF1expressionvectorwasconstructedandtransfectedintoanEBVnegativeandmoderatelydifferentiatedgastriccancercelllineSGC7901.ThestablytransfectedcellclonesweregeneratedbylimitingdilutionandG418screening,andBARF1expressionwasconfirmedbyRTPCR.ThebiologicalbehavioranalysiswereconductedincludingcellsurvivecurvedrawingandapoptosisobservationafterHoechst33342staininginducedbyanticancerdrugdiamminedichloroplatinum(DDP),cellgrowthcurvedrawing,softagarcolonyformationassay,aswellascellmigrationtestunderthecontrolofvacantpSG5vectortransfectedclones.Results：BARF1expressioningastriccancercellsledtomoreresistanttoapoptosisinducedbyDDP,fasterproliferation,highercolonyformationrateinsoftagar,andstrongermigrationcapability.Conclusion：BARF1genehadallaroundoncogenicabilityingastricepithelialcellsandmayplayanimportantroleinthewholeprocessofoccurringandpromotingEBVassociatedgastriccarcinoma.［Keywords］EpsteinBarrvirus;BARF1;gastriccancer;cellbiologicalbehaviorEB病毒（EpsteinBarrvirus,EBV）属于人γ疱疹病毒，与多种恶性肿瘤相关，如Burkitt淋巴瘤（BL）、Hodokin病、鼻咽癌以及胃癌等。约2%～16%的胃腺癌组织中可检测到EB病毒潜伏感染所表达的EB病毒编码---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---的小RNA（EBERs），称为EB病毒相关胃癌（EBVaGC）［1］。BARF1是EB病毒编码的癌基因，约90％病毒相关胃癌组织中可检测到BARF1蛋白［2,3］，但其在病毒相关胃癌发生中的作用尚不十分清楚。我们采用BARF1真核表达载体转染的方法，建立BARF1稳定表达的胃癌细胞系，全面探讨BARF1基因表达对胃癌细胞生物学行为的影响，从而初步了解其在EB病毒相关胃癌细胞中的致癌作用。1材料和方法1.1细胞株、引物、质粒及实验材料EB病毒转化的绒猴淋巴细胞系B958和人胃癌细胞系SGC7901为中国科学院上海细胞库提供。所用引物根据文献［4，5］合成，见表1，其中引物1为克隆用，引物2为鉴定用。引物合成及DNA序列测定委托上海生工生物工程公司进行。改良pSG5真核表达载体［用PshBI从pcDNA3载体上切下新霉素抗性（Neor）表达单元，插入到pSG5的NdeI位点］为日本北海道大学遗传医学研究所肿瘤病毒室高田贤藏教授惠赠。pGEMTEasyTA克隆载体购于Promega公司，质粒和真核细胞DNA提取和琼脂糖凝胶DNA片段回收试剂盒购于Axygen公司。限制性DNA内切酶、T4DNA连接酶、TaqDNA聚合酶及DNA去磷酸化试剂盒购于TaKaRa生物工程公司。细胞转染试剂Lipofectamine2000购于Invitrogen公司，RPMI1640和DMEM培养基、G418和真核细胞RNA提取试剂Trizol购于Gibco公司。新生牛血清（NCS）购于民海生物工程公司。RTPCR试剂盒购于Toyobo公司。细胞培养板、细胞迁移实验用Transwell小室购于Corning公司。表1引物序列1.2BARF1稳定表达细胞克隆的获得与鉴定1.2.1细胞培养B958使用RPMI1640，SGC7901...