在全球海水养殖业也占据了极其重要的地位.众着重要作用.其中,肝胰腺某些蛋白质功能会影生殖调控.但关于肝胰腺蛋白质在雌性三疣梭子胞向卵母细胞迁移和卵黄发生的前提.吴旭干等第26卷第4期,2013年10月Vol.26No.4,Oct.2013宁波大学学报（理工版）JOURNALOFNINGBOUNIVERSITY(NSEE)首届中国高校优秀科技期刊奖浙江省优秀科技期刊一等奖交配与未交配三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质组学的初步分析徐洲,母昌考,李荣华,宋微微,王春琳*（宁波大学海洋学院,浙江宁波315211）摘要:采用双向电泳和基质辅助激光解析串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)研究三疣梭子蟹交配与未交配雌性个体肝胰腺蛋白质表达.使用PDQuest软件分析双向电泳凝胶图像,结果显示:交配组和未交配组凝胶图像上分别能检测到(400±25)和(530±16)个蛋白点,其中共有15个蛋白点表达量有显著性差异(P＜0.05).与未交配组相比,交配组三疣梭子蟹肝胰腺中6个蛋白点的表达量显著性上升.经质谱鉴定为:磷酸丙糖异构酶、磷酸丙酮酸水合酶、过氧化氢酶、δ-谷胱甘肽S-转移酶、ATP合酶α-亚基和胰凝乳蛋白酶.此外,交配组三疣梭子蟹肝胰腺中9个蛋白点的表达量显著性下降.经质谱鉴定为:延伸因子2、长链酰基CoA脱氢酶、假血蓝蛋白1、假血蓝蛋白2、异柠檬酸脱氢酶、线粒体乙醛脱氢酶X、转酮醇酶、血蓝蛋白α-亚基和腺苷高半胱氨酸酶A.该结果可为揭示三疣梭子蟹卵巢发育机理提供重要参考.关键词:三疣梭子蟹;蛋白质组学;交配;肝胰腺中图分类号:Q513文献标志码:A文章编号:1001-5132（2013）04-0001-06三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus),隶属于甲壳纲、十足目、梭子蟹科,广泛分布于中国,日本和韩国沿海地区,是我国重要的海产经济蟹类,[1]所周知,肝胰腺是甲壳动物的重要器官,在甲壳类动物生长、免疫反应和代谢等多种生理过程中发挥[2]响卵巢的发育.例如,普通滨蟹(Carcinusmaenas)维甲酸X受体会刺激卵巢的发育,而中华绒螯蟹(Eriocheirsinesis)硒蛋白M在个体快速发育期参与蛋白质和脂肪含量变化会发生规律性变化.虽然以往学者对三疣梭子蟹肝胰腺蛋白质含量在卵巢发育过程中的变化趋势已有报道,但研究方法大多是对肝胰腺进行组织切片和生化成分测定,而没有蛋白表达水平研究的报道.笔者旨在探究三疣梭子蟹卵巢发育过程中,交配和未交配三疣梭子蟹肝胰腺中蛋白质表达差异情况,并对产生差异的原因进行分析.对交配与未交配雌性三疣梭子蟹肝胰腺开展差异蛋白质组学研究有助于深入了解肝胰腺的功能.[3]蟹卵巢发育中表达量变化和所发挥主要功能的文1材料与方法献还未见报道.有学者指出三疣梭子蟹生殖蜕壳后没有交配的个体卵巢会停止发育,因为交配是诱导滤泡细[4][5]指出某些三疣梭子蟹卵巢发育过程中,肝胰腺中1.1三疣梭子蟹交配及样品采集三疣梭子蟹饲养于浙江宁波鑫亿鲜活水产有限公司,随机挑选健康成年雄性和雌性三疣梭子蟹各30只,每只体重约为180g.雄性和雌性分别饲养于塑料饲养筐内(40cm×40cm×40cm).于收稿日期:2013−03−25.宁波大学学报（理工版）网址:http://journallg.nbu.edu.cn/基金项目:国家自然科学基金（41106123）;浙江省农业新品种选育重大专项（2012C12907-3）;浙江省海水养殖重点科技创新团队项目（2010R50025-08）;宁波市海洋与渔业专项（2011-1-7）;浙江省教育厅科研项目（Z201121258）;宁波市农业科技专项（201015）;宁波市海洋蟹类产业科技创新团队项目（2011B81003）.第一作者:徐洲（1989－）,男,江西九江人,在读硕士研究生,主要研究方向:遗传育种与种质保护.E-mail:xuzhou9559@163.com*通信作者:王春琳（1965－）,男,浙江台州人,博导/教授,主要研究方向:水产养殖.E-mail:wangchunlin@nbu.edu.cnmol·L硫脲,4%CHAPS,60mmol·L体积为350μL(8mol·L尿素,4%CHAPS,65mmol·LDTT,0.5%IPGbufferpH3~10),IEF程序:2宁波大学学报（理工版）20132011年9月将雌蟹和雄蟹各30只以1:1的数量比例放入同一饲养筐内,共30对.使用塑料栅栏将其中15对雌蟹和雄蟹分隔开,阻止其抱对和交配,视为未交配组.交配组雌蟹和雄蟹不做上述处理.观察发现,交配组雌蟹生殖蜕壳后,雌雄蟹能抱对并交尾,交尾结束后可观察到纳精囊中精荚呈桃红色,并随着雌蟹甲壳硬化,精荚逐渐缩小并...