麻醉学专业优秀论文异氟烷对老年大鼠海马胆碱乙酰转移酶的影响关键词：异氟烷老年麻醉海马胆碱乙酰转移酶术后认知功能摘要：目的及意义：近来研究发现异氟烷等麻醉手术后，老年人认知功能易发生改变，归纳为术后谵妄(post-operativedelirium，PD)和术后认知功能障碍(postoperativecognitivedysfunction，POCD)。PD常发生于术后1～3天，POCD常发生于术后1周内，有研究认为术后2～5天最为严重，表现为精神错乱、焦虑、人格的改变及记忆受损等，PD和POCD在严重的情况下都可发展为老年性痴呆，其机制尚不清楚，目前认为老龄是危险因素。研究表明中枢胆碱能神经系统与学习记忆密切相关，作为该系统的标志酶.胆碱乙酰转移酶(CHAT)的活性降低是导致学习记忆障碍的重要原因，并且大量的研究也证实了乙酰胆碱能传递系统可能是许多全身麻醉药的重要靶区。因而推测老年术后认知功能发生改变的机制可能与麻醉药抑制中枢胆碱能系统和中枢胆碱能系统功能随老龄化衰退有关。因此本实验应用Moms水迷宫检测异氟烷麻醉后第2，3天老年、青年大鼠空间记忆并应用Western和荧光定量PCR方法检测海马区CHAT蛋白含量及mRNA表达的改变，探讨异氟烷对老年术后认知功能改变机制。材料与方法：1.实验动物和主要材料选用健康雌性SD大鼠(第三军医大学实验动物中心提供)，老年组14月龄、体重400～420g:青年组3月龄、体重190～210g。Morris水迷宫(StoeltingCompany.U.S.A.)，DagerFabius麻醉机(德国)，HYUNDA麻醉气体监测仪，异氟烷(上海雅培)，RNAsimpleTotalRNAKit(天根生化科技有限公司)，RT-PCRKit(TOYOBO公司)，PCR扩增引物(上海生工生物工程技术服务有限公司)，SYBR定量PCR试剂盒(TOYOBO公司)，2000bpDNALadderMarker天根生化科技有限公司，DEPC(美国Sigma公司)，琼脂糖(西班牙Biowest公司)，第一抗体：抗Rat-CHAT(SANTACRUZ公司)，羊(Goat)抗-GAPDH单克隆抗体(SANTACRUZ公司)，第二抗体：辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG(H+L)(北京中杉金桥公司)，辣根过氧化物酶标记山兔抗羊IgG(H+L)(北京中杉会桥公司)，ABIPrism7500型荧光定量PCR仪(美国ABI公司)，PCRSystem9700扩增仪(美国ABI公司)核酸蛋白分析仪(德国BeckmanCoupe公司)，转移槽(北京六一仪器厂)，美国Bio-Rad酶标仪、美国Bio-Rad电泳槽(MINIPROTEANIITM)、美围Bio-Rad电泳仪(3000XI)、美国Bio-Rad凝胶图像分析系统等。2.方法：2.1Morris水迷宫检测异氟烷麻醉后第2，3天对老年、青年大鼠空间记忆影响2.1.1Morris水迷宫实验程序：①定位航行实验(placenavigationtest，PNT):实验前一天下午将大鼠放入水迷宫中自由游泳2min以熟悉环境。实验分二阶段：第一阶段，大鼠异氟烷麻醉前开始，实验历时4天半，每天在固定时间分上、下午两个时间段进行，共10个时间段，每时间段训练4次。平台置于2象限，实验时分别从四个象限的池壁中点，将大鼠面壁轻放入水中，每时间段4次随机从不同象限入水。大鼠在水中游泳一段时间后爬上站台，并在平台停留5s，则认为找到站台如果在120s内未找到站台，则由试验者将其引上站台并停留20s，潜伏期记为120s。第二阶段在异氟烷麻醉后第2，3天进行测试。图像采集系统及分析系统自动记录保存大鼠的运动轨迹，找到平台的潜伏期、游泳时间、游泳速度、游泳距离及寻找站台的搜寻策略等信息。②空间探索实验(spatialprobetest，SPT):完成定位航行实验后撤离平台，选定与平台象限相对的象限的中点为入水点，记录大鼠搜寻平台的搜寻测略，平台象限游泳距离与总距离之比。2.1.2老年和青年大鼠异氟烷吸入全身麻醉老年、青年大鼠随机分为异氟烷麻醉组(n=16agedand16young)和对照组(n=12agedand12young)。麻醉组给予1.2％异氟烷麻醉2小时，并监测异氟烷气体的浓度及大鼠的平均动脉压、心率、脉搏氧饱和度、血气等生命体征，麻醉后使其自然苏醒。麻醉结束后将各组动物分为两部分，一部分麻醉后第2，3天断头处死取出海马组织，采用实时定量PCR和Westernblot方法检测老、青年大鼠CHAT在海马区蛋白和转录水平的表达，另一部分应用Morris水迷宫检测麻醉后第2，3天空间记忆能力。2.2.异氟烷对老、青年大鼠海马区CHAT的影响异氟烷麻醉后第2，3天分别断头处死...