构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒陈园园1，徐枫1，杨辉2，刘婷1，周建桥3，蔡晨蕾4，叶园园1，刘培峰4，韩宝三1(1上海交通大学医学院附属新华医院普外科、普外科实验室，上海市200092；2教育部高分子合成与功能构造重点实验室，浙江大学高分子科学与工程学系，浙江省杭州市310027；3上海交通大学医学院附属瑞金医院超声科，上海市200025；4上海交通大学医学院附属仁济医院中心实验室，上海市200127)引用本文：陈园园，徐枫，杨辉，刘婷，周建桥，蔡晨蕾，叶园园，刘培峰，韩宝三.构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒[J].中国组织工程研究，2016，20(30):4425-4433.DOI:10.3969/j.issn.2095-4344.2016.30.003ORCID:0000-0002-0322-5403(韩宝三)文章快速阅读：陈园园，女，1989年生，江苏省泗洪县人，汉族上海交通大学医学院在读硕士，医师，主要从事乳腺癌的临床与基础及纳米材料的研究。通讯作者：韩宝三，主任医师，上海交通大学医学院附属新华医院普外科、普外科实验室，上海市200092中图分类号:R318文献标识码:A文章编号:2095-4344(2016)30-04425-09稿件接受：2016-05-18文题释义：纳米级超声对比剂：具有较强的穿透能力，能够穿越血管内皮进入组织间隙，使血管外靶组织显像成为可能，从而超越了微米级对比剂仅能发生血池内显像的局限性，推动了超声分子显像技术的发展，特别是针对肿瘤等重大疾病的早期诊断技术；使构建纳米级靶向超声对比剂成为国内外研究的热点。超声靶向分子成像技术：是利用对比剂表面固有的化学特性或通过对对比剂表面进行特殊处理，构建特异性靶向超声对比剂，使其经静脉注入后能靶向性聚集并较长时间滞留于靶组织器官，再通过超声对比显影，产生分子水平显影，提高超声对早期病变的诊断及鉴别能力。摘要背景：研究表明，纳米级超声对比剂具有较强的穿透能力，使血管外靶组织显像成为可能，超越了微米级对比剂仅能发生血池内显像的局限性。目的：构建叶酸修饰的乳腺癌靶向纳米超声造影微粒，评估其与细胞靶向结合的能力及体外超声成像效果。方法：采用超声乳化-蒸发法制备对比剂聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒(记为mPP/PFOB)和叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒(记为mPPF/PFOB)。①生物相容性检测：取对数生长期的人皮肤成纤维细胞HFF-1、人乳腺癌MCF-7细胞，分别加入0，0.005，0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，1g/L的mPP/PFOB或mPPF/PFOB，培养24h后检测细胞活力。②体外寻靶能力检测：取对数生长期的HFF-1、MCF-7细胞，均分3组干预，A、B组分别加入Cy5标记的mPP/PFOB与mPPF/PFOB，C组在加入Cy5标记的mPP/PFOB前以叶酸处理2h，培养0.5h后，流式细胞仪检测荧光强度；培养20min后，共聚焦显微镜观察对比剂在细胞中的分布。③体外超声显影：实验分3组，A组为生理盐水，B组制备mPPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液，C组以mPPF/PFOB纳米粒与生理盐水混悬液重悬MCF-7细胞沉淀，制备纳米粒与细胞混悬液，将3种液体加入乳胶手套中扎紧，采用超声诊断仪检测体外超声成像效果。结果与结论：①生物相容性检测结果：两种纳米粒无明显的细胞毒性；②流式细胞仪检测结果：在MCF-7细胞中，B组平均荧光强度明显高于A组和C组；而在HFF-1细胞中，3组平均荧光强度无显著差别；③共聚焦显微镜观察结果：mPPF/PFOB主要聚集在MCF-7细胞膜周围，mPP/PFOB则分布在胞浆。④体外超声显影结果：mPPF/PFOB与MCF-7细胞结合后，在体外能增强超声回声；⑤结果提示：叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒具有良好的生物相容性，具有与乳腺癌MCF-7细胞靶向结合能力和增强超声显像效果。乳腺癌靶向纳米超声造影微粒的构建称取叶酸-聚乙二醇-聚乳酸-羟基乙酸共聚物4mg，充分溶于200μL二氯甲烷逐滴加入40µL液态氟碳，超声波细胞粉粹仪震荡，超声强度400W，超声时间每次为10s，共8次再加入2mLF68(1%)溶液，超声强度400W，时间设为每次为10s，共8次真空旋转蒸发除去二氯甲烷，即得造影微粒叶酸修饰的聚乙二醇化乳酸羟基乙酸共聚物包裹液态氟碳的纳米粒ChenYuan-yuan,Studyingformaster’sdegree,Physician,Dep...