栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞兴奋性毒性摘要：目的观察栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）兴奋性毒性损伤的影响，并初步探讨其作用机制。方法采用谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤造模。将细胞随机分为正常组、谷氨酸组和栝楼桂枝颗粒低（200μg/mL）、中（400μg/mL）、高（800μg/mL）剂量组，MTT法和LDH法检测PC12活力；Caspase-3活性检测法、AnnexineV/PI双染色法检测细胞凋亡，Westernblot和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax蛋白和mRNA表达。结果与谷氨酸组比较，MTT法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12活力升高，LDH法栝楼桂枝颗粒各剂量组细胞活力降低；AnnexineV/PI双染色法栝楼桂枝颗粒各剂量组PC12凋亡率降低；Caspase-3活性检测法栝楼桂枝颗粒各剂量组Caspase-3活性降低；RT-PCR及Westernblot检测栝楼桂枝颗粒各剂量组Bax表达降低、Bcl-2表达升高。结论栝楼桂枝颗粒对谷氨酸诱导PC12兴奋性毒性损伤有一定的保护作用，其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。关键词：栝楼桂枝颗粒；谷氨酸；肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；细胞凋亡DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.06.010：R285.5文献标识码：A：1005-5304（2017）06-0039-05Abstract：ObjectiveToinvestigatetheeffectsofGualouGuizhiGranulesonexcitatorytoxicdamageofPC12inducedbyglutamate；ToprimarilyexploretheinvolvedprotectivemechanismofGualouGuizhiGranules.MethodsExcitatorytoxicdamageofPC12inducedbyglutamatewasusedtoestablishmodels.Cellsweredividedintonormalgroup，glutamategroup，andGualouGuizhiGranuleslow-（200μg/mL），medium-（400μg/mL）andhigh-dose（800μg/mL）groups.MTTandLDHassaymethodswereusedtodetectPC12activity；Caspase-3activitydetectionmethodandAnnexineV/PIdoublestainingmethodwereusedtodetectcellapoptosis；WesternblotandRT-PCRwereusedtodetectBcl-2，BaxproteinandmRNAexpression.ResultsComparedwithglutamategroup，MTTshowedthatallGualouGuizhiGranulesgroupscouldimprovePC12activity，andLDHshowedthatcellactivityinallGualouGuizhiGranulesgroupsdecreased；AnnexineV/PIdoublestainingmethodshowedthatallGualouGuizhiGranulesgroupscoulddecreasethePC12apoptosis；Caspase-3activitydetectionmethodshowedthatallGualouGuizhiGranulesgroupscoulddecreasetheactivityofCaspase-3；WesternblotandRT-PCRshowedthatallGualouGuizhiGranulesgroupscouldreduceBaxexpressionandincreaseBcl-2expression.ConclusionGualouGuizhiGranuleshavecertainprotectiveeffectsonexcitatorytoxicdamageofPC12inducedbyglutamate，whichmayberelatedtoitsanti-apoptoticactivity.Keywords：GualouGuizhiGranules；glutamate；PC12；cellapoptosis?S着世界老龄化的加剧，脑卒中成为发展中国家高致残率、高死亡率、高发病率的一种疾病，给人类健康造成了巨大的威胁。栝楼桂枝颗粒（处方源于栝楼桂枝汤）为福建省第二人民医院院内制剂，临床用于治疗脑卒中后痉挛性偏瘫。临床观察显示，栝楼桂枝汤可明显改善中风后患者运动功能、痉挛状态及日常生活活动能力[1]。体内外研究也表明，栝楼桂枝汤具有抗氧化、抗炎及抗兴奋性氨基酸毒性损伤的作用[2-7]。本研究在前期实验的基础上，采用谷氨酸诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）兴奋性毒性损伤为模型，观察其对模型大鼠的影响，并初步探讨其作用机制，为临床应用提供一定的实验依据。1实验材料1.1细胞高分化大鼠PC12，北京北纳创联生物技术研究所。1.2药物及制备栝楼桂枝颗粒，福建省第二人民医院药剂科提供，无菌条件下用含1%胎牛血清1640培养基配制成1mg/mL的母液，使用时稀释成不同浓度的工作液。1.3主要试剂与仪器谷氨酸，Sigma公司；噻唑蓝（MTT），Sigma公司；AnnexinV/PI凋亡试剂盒，南京凯基生物科技发展有限公司；乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，上海碧云天生物技术公司；Caspase-3AssayKit，MolecularProbes；兔抗大鼠Bcl-2、Bax和β-actin抗体，CellSignalling公司；辣根过氧化酶标记羊抗...