细胞生物学专业毕业论文[精品论文]ADPN基因构建、蛋白表达及其对宫颈癌Hela细胞生长的影响关键词：脂联素基因构建蛋白表达宫颈癌摘要：脂联素(Adiponectin，ADPN)表达水平的降低与乳腺癌、前列腺癌、胃癌等的发生存在负相关，血浆ADPN水平可以作为肿瘤发生的一个重要检测指标。体外研究报道，ADPN能抑制乳腺癌和前列腺癌细胞的生长。而有关ADPN作用于宫颈癌的研究尚未报道，本文探讨ADPN对宫颈癌Hela细胞生长的影响。为了获得重组人ADPN基因及有活性的ADPN蛋白产物，我们根据ADPNcDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段，经重叠PCR技术获得重组人ADPN基因。构建pET-22b(+)/ADPN表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达。结果发现目的蛋白以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的30％以上。表达产物通过Ni2+-NTA.柱纯化，透析法进行复性，SDS-PAGE分析显示，其分子量约为30kDa，与预期结果一致。MTT实验显示，我们表达的重组人ADPN具有抑制人内皮细胞生长的活性。为了检测ADPN对肿瘤细胞作用机制，我们采用FITC荧光标记法和RT-PCR，检测MGC-803、BGC-823、HT-29和Hela细胞中ADPN受体表达情况，MTT法检测ADPN对这些细胞株的生长影响，流式细胞仪分析ADPN对Hela细胞周期影响，RT-PCR检测.ADPN对细胞周期因子和凋亡基因表达影响，Westernblotting分析AMPK磷酸化情况，结果表明这些癌细胞都表达ADPN受体，ADPN对Hela细胞敏感，0.1μg/mL时就能抑制其生长，10μg/mLADPN能诱导其发生凋亡。ADPN下调细胞周期正面调节子cyclin-D1和c-myc的表达，上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子p53的表达，使细胞停留在G0/G1期。ADPN上调凋亡基因Bax的表达，下调抗凋亡基因Bcl-2的表达，诱导Hela细胞发生凋亡。ADPN在5～30min内使AMPK发生磷酸化，调节Hela细胞生长。本文成功构建了ADPN基因，建立了高效的原核表达系统和蛋白纯化方法，发现ADPN结合其受体，下调细胞周期正面调节子cyclinD1和c-myc的表达，上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子P53的表达抑制Hela细胞的生长，并诱导Hela细胞发生凋亡。这些研究工作为进一步探讨ADPN的抗肿瘤机制奠定了基础。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---正文内容脂联素(Adiponectin，ADPN)表达水平的降低与乳腺癌、前列腺癌、胃癌等的发生存在负相关，血浆ADPN水平可以作为肿瘤发生的一个重要检测指标。体外研究报道，ADPN能抑制乳腺癌和前列腺癌细胞的生长。而有关ADPN作用于宫颈癌的研究尚未报道，本文探讨ADPN对宫颈癌Hela细胞生长的影响。为了获得重组人ADPN基因及有活性的ADPN蛋白产物，我们根据ADPNcDNA序列设计并合成9条寡聚核苷酸片段，经重叠PCR技术获得重组人ADPN基因。构建pET-22b(+)/ADPN表达载体，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达。结果发现目的蛋白以包涵体形式表达，表达量占菌体总蛋白的30％以上。表达产物通过Ni2+-NTA.柱纯化，透析法进行复性，SDS-PAGE分析显示，其分子量约为30kDa，与预期结果一致。MTT实验显示，我们表达的重组人ADPN具有抑制人内皮细胞生长的活性。为了检测ADPN对肿瘤细胞作用机制，我们采用FITC荧光标记法和RT-PCR，检测MGC-803、BGC-823、HT-29和Hela细胞中ADPN受体表达情况，MTT法检测ADPN对这些细胞株的生长影响，流式细胞仪分析ADPN对Hela细胞周期影响，RT-PCR检测.ADPN对细胞周期因子和凋亡基因表达影响，Westernblotting分析AMPK磷酸化情况，结果表明这些癌细胞都表达ADPN受体，ADPN对Hela细胞敏感，0.1μg/mL时就能抑制其生长，10μg/mLADPN能诱导其发生凋亡。ADPN下调细胞周期正面调节子cyclin-D1和c-myc的表达，上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子p53的表达，使细胞停留在G0/G1期。ADPN上调凋亡基因Bax的表达，下调抗凋亡基因Bcl-2的表达，诱导Hela细胞发生凋亡。ADPN在5～30min内使AMPK发生磷酸化，调节Hela细胞生长。本文成功构建了ADPN基因，建立了高效的原核表达系统和蛋白纯化方法，发现ADPN结合其受体，下调细胞周期正面调节子cyclinD1和c-myc的表达，上调p21WAF1/CIP1和肿瘤抑制子P53的表达抑制Hela细胞的生长，并诱导Hela细胞发生凋亡。这些研究工作为进一步探讨...