家蚕SOCS6的细胞定位及表达谱分析#刘佳宾，曹广力，薛仁宇，胡小龙，彭景琨，贡成良**（苏州大学基础医学与生物科学学院，苏州215123）51015202530摘要：细胞信号转导抑制因子（suppressorofcytokinesignaling，SOCS）基因是JAK/STAT信号通路的负调节基因。本研究克隆了家蚕BmSOCS6基因的ORF序列，序列分析结果显示，BmSOCS6基因的ORF为918bp，编码305aa，BmSOCS6蛋白具有典型的跨膜区和SH2超家族保守结构域。qPCR分析结果显示，BmSOCS6mRNA丰度在家蚕精巢中最高，在中肠、脂肪、血细胞和丝腺相对较低。将BmSOCS6基因克隆进原核表达载体pET28a(+)，在E.coli中表达了重组BmSOCS6。利用重组蛋白免疫小鼠，制作了抗BmSOCS6多抗。细胞定位结果显示BmSOCS6主要定位在BmN细胞的细胞质中，免疫荧光研究结果显示，BmSOCS6在生殖细胞中均有表达。关键词：家蚕；SOSC6基因；表达谱；细胞定位，免疫组化：S881.2；Q751CellularlocalizationandexpressionprofilingofSOCS6insilkworm,BombyxmoriLIU激abin,CAOGuangli,XUERenyu,HUXiaolong,PENG激ngkun,GONGChengliang(SchoolofBiologyBasicMedicalScience,SoochowUniversity,Suzhou215123)Abstract:Suppressorofcytokinesignaling(SOCS)geneisanegetiveregulategeneofJAK/STATsignalpathway.Inthisstudy,theopenreadingframe(ORF)ofsilkwormBmSOCS6wascloned.SequenceanalysisshowedthattheORFwas918bpinsizeandencodes305aminoacidresidues,BmSOCS6proteinhasatransmembraneregionandatypicaldomainconservedinSH2superfamily.TheresultsofqPCRindicatedthattheabundanceofBmSOCS6mRNAinthetestiswasthehighest,waslowerinthemidgut,fatbody,hemocyteandsilkgland.TheBmSOCS6genewasclonedintotheprokaryoticexpressionvectorpET28a(+),recombinantBmSOCS6wasexpressedinE.coli,therecombinantBmSOCS6wasusedtoimmunizemicetogenerateanti-BmSOCS6polyclonalantibody.CellularlocalizationshowedBmSOCS6mainlylocalizedinthecytoplasmofBmNcells,immunofluorescencestudiesshowedthatBmSOCS6werebothexpressedingermcells.Keywords:Bombyxmori;SOSC6gene;expressionprofile;cellularlocalization;Immunohistochemistry350引言SOCS基因是JAK/STAT信号通路的负调节基因。SOCS家族包括八种蛋白：CIS（Cytokine-inducibleSH2-containingprotein）和SOCS1-SOCS7。CIS和SOCS1-SOCS7都包含一个SH2中心域，一个作为SOCSbox的保守的C末端和一个特异性的N末端。SOCS成40员集中分布在细胞质中，在胞质中与靶基因相互作用[1,2]。SOCS6在SOCS家族中研究相对较少，与其他SOCS家族的成员相比，它在N末端区域额外增加300个氨基酸残基，但是这个额外增加区域的功能依旧不清楚。因此，SOCS6蛋白可能有不同于其他SOCS家族成员的功能。研究显示SOCS6相互作用的蛋白主要分布在细胞质中，且在胞质中进行调节。例如---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---基金项目：本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金（编号20113201130002）的资助。作者简介：刘佳宾，天津市人，在读硕士研究生，目前主要从事家蚕信号传导研究，liu激abin9891@126通信联系人：贡成良，男，教授，博士生导师.gongcl@suda.edu-1----本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---SOCS6与胰岛素受体IRS-2,IRS-4和磷脂酰肌醇3-激酶的P85亚基相互作用。它也破坏IR455055606570信号[3-6]。异位表达的SOCS6蛋白与KIT受体相互作用，负向调节KIT受体介导的细胞增殖[6,7]。SOCS6也与HOIL-1（蛋白酶体介导的降解过程中的一种E3泛素连接酶）相互作用[8]。有报道称，荧光标记的SOCS6或者是过表达的SOCS6可能定位在核内[9]。也有研究发现，内源性的或者过表达的SOCS6在核内和胞质中都有定位。SOCS6的定位依赖于一个未鉴定结构域的N末端区域[10]。曾有研究报道SOCS6发现在细胞质和细胞核中，SOCS6都可以降低STAT3蛋白的水平。减少了的STAT3的活性依赖于SOCS6的C末端[10]。SOCS在昆虫中可能存在4种，其中果蝇的SOCS36E相当于SOCS5，果蝇...