MALDI-TOF质谱技术及Eiotyper数据库在养殖场空气微生物鉴定中的应用李楠，刘文森刘林娜郝镯诈树民，孟轲音，何扬，万忠海汪承宇W，李吉平W库事医学科学院军事兽医研究所/吉林省人曽共患病预防与控制重点实验室，吉林长春130122)摘要：以16SrRNA测序法为标准方法，利用MALDI-TOF质谱技术及Eiotypei•数据库对某猪场210株空气分离株进行鉴定及准确率分析。结果显示910%的菌株被准确鉴定到种水平95・7%被准确鉴定到属水平。研究表明MALDI-TOF质谱技术可以快速准确检测空气微生物为养殖场环境质量监测提供了新的技术支持。关键词：空气微生物MALDI-TOF质谱技术Eiotypcr数据库：S85261文献标志码：A1005-45452014)12-2031-04TheapplicationoftheMALDI-TOFMSandbiotyperdatabaseintheidentificationoffarmairbornemicroorganismsLINan'LIUWeii-sen'LIULin-na4IAOZhuo'LlShu-min，MENGKe-yin12HEYangWANZhong-haiWANGCheng-yu*'Ll激-ping*4<eyLaboratoryof激linProvinceforZoonosisPreventionandControlMilitaryVeterinaryResearchInstitute'AcademyofMilitaryMedicalScienoes，Changchun130122China)Abstract:Atotalof210airbornebacterialcolonieswerecollectedfromaswinehouse'MALDI-TOFMS-basedBiotyperdatabasewereusdedtoidentifyandevaluatedforaccuracy'16SrRNAgenesequencingwasservedasthereferencemethod-Theresultsshowedthat910%and95-7%oftheisolateswereidentifiedcorrectlytothespecieslevelandgenuslevelrespectively-ItindicatesthatMALDI-TOFMScandetectairbornemicroorgamsmsrapidlyandaccurately%vliichofferesanewtechnicalsupportforfarmenvironmentqualitymonitoring•KeywordsAirbornemicroorganisms:MALDI-TOFMStcchnique^iotypcrdatabase*CorrespondingauthortmailjipingIi1964@126oom；173306541@jqoom1收稿日期201404-03基金项目：占郴係技嫌订戈|冏丿烦H(20130101092JC)作者简介李楠Q9^3)，女将士。2通讯作若'E-mail:激pin@il964@126cornT73306541©cmcoin近年來随着集约化、规模化畜禽产业的发展，动物养殖密度增高，饲养空间相对狭窄，致使由动物活动、粪便、毛皮、饲料产生的各类微生物(如禽流感、鸡新城疫病毒、SARS病毒、结核分枝杆菌等)在空气中聚集并迅速传播，不仅造成环境污染，而且严重危害了动物和饲养人员的身体健康，甚至可引起某些传染病的暴发流行(1〕。因此研究空气中微生物的种类对养殖环境的监测具有重要意义，如何快速、准确地检测空气微生物则成为研究重点。冃前空气微生物的检测方法主耍基于形态学及生化反应，这些传统方法能将环境分离株鉴定到属水平，但对于种水平的鉴定缺乏准确性曲〕。16STRNA测序法是目前公认的金标准”方法，但其昂贵的测序成本和繁琐的操作程序令许多实验室望而生畏，不利于微生物的快速检测。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrixassistedlaserdesorptionionizationtim^-of—fli^itmassspectrometry^I'XLDI—TOFMS)是20世纪80年代出现的生物质谱技术，该技术凭借其快速准确、操作简便、高通量等特点已广泛用于临床病原菌检测。少数文献缨报道了应用该技术检测空气來源的葡萄球菌属"了'但对于空气中其它菌群的检测能力尚不清楚。本研究应用MALDI-TOFMS及Biotype擞据库对空气分离株(包括临床常见菌和罕见菌)进行全面检测，旨在评估质谱技术检测空气微生物的能力，为养殖场环境质显监控捉供新的技术方法。1材料与方法1-1菌株來源來口吉林省某猪场空气样本12试剂胰蛋白腺大豆琼脂培养基CTSA）购自青岛海博科技公司；甲酸、三氟乙酸CTFA）、乙月青、乙醇为色谱纯，均购自Sigma0-氤基-4-瓮基肉桂酸基质（HCCA）购自Bruker公司，使用前称取10mg基质加入到1mL含50%乙月青，2•5%TFA的溶液中振荡数秒至形成饱和溶液，离心取上清备用；细菌基因组DNA提取试剂盒'16SrRNA细菌鉴定PCR试剂盒购自TaKaRa。1-3主要仪器：空气采样器^iiicrobioMB2ciirsampler*UK）°德国布鲁克公司bruker）Autoflex111MALDI-TOFMS，配有Biotyper20软件数据库。1-4空气样本釆集该猪场有3个猪舍每个舍重复采集2个样本。采样介质为TSA培养基。...