复方地黄软膏无菌检查法的方法建立0兀市盘晶药晶检验检测中心四川/兀628000)【摘要】目的：建立复方地黄软膏的无菌检查法。方法：供试品采用《中国药典》2015年版四部无菌检查法中直接接种法，对样品进行稀释并培养14天，再转种继续培养3天，同时用阴性和阳性对照。结果：供试品在继续培养3天后无菌，阳性对照在培养3天后生长良好。结论：该方法能除去复方地黄软膏的抑菌作用，使无菌检查结果准确可靠，可作为复方地黄软膏的无菌检查法。【关键词】复方地黄软膏：无菌检查；建立【中图分类号】R927.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8231(2016)27-0037-02ToestablishFufangDihuangRuangaosterilitytestmethodDongYihu.ThefoodanddruginspectiontestingcenterinGuangyuan628000【Abstract】ObjectiveToestablishFufangDihuangRuangaosterilitytestmethod.MethodsThetestused"ChinesePharmacopoeia〃(ChP)2015editionofappendixdirectinoculationsterilitytestmethodinthemethodofdilutionandculturedfor14days,sub-culturedfor3daysinoculation,bothwithnegativeandpositivecontrols.ResultsThetestcontinuedtotrain3daysinsterile,positivecontrolcontinuedtogrowwellculturedfor3days.ConclusionThismethodcanremovetheinhibitoryeffectofFufangDihuangRuangao,sothatsterilitytestresultsisaccurateandreliable,anditcouldbeusedforthequalitycontrolofthepreparation.【Keywords】FufangDihuangRuangao;Sterilitytest复方地黄软膏是由地黄、黄连、黄柏、黄芩、麦芽、甘草等组成，以芝麻油为辅料，蜂蜡为基质，只有清热燥湿，凉血解毒，祛腐生肌的功效［1］。复方地黄软膏是医疗机构自制制剂，未收载于国家法定标准，需对其无菌检查方法进行建立并验证。该品种系半固体外用制剂，含有盐酸小檗碱等抑菌成分，无菌检查法如直接采用薄膜过滤法，无法过滤，因此采用直接接种法进行试验。1.仪器和材料1.1仪器BSC-1000IIA2生物安全柜；SW-CI-1C超净工作台；DNP-9082电热恒温培养箱；SPX-150B生化培养箱等。1.2培养基硫乙醇盐流体培养基，改良马丁培养基，营养琼脂培养基，玫瑰红纳琼脂培养基，营养肉汤培养基，培养基标的生产厂家为：中国食品药品检定研究院。助溶剂：聚山梨酯-80（分析纯）菌种：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉，来源均为：中国食品药品检定研究院。样品由四川省广元监狱医院提供。1.3试验环境试验环境采用C级背景下的局部A级（C+A）,单向流空气区、工作台面及环境定期按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁浄度确认。检验前开启空气浄化系统40分钟以上，检验过程中对试验环境进行监控。2.方法与结果2.1无菌检查法的方法学验证2.1.1菌液制备取经35°C培养18〜24h的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌和枯草芽胞杆菌的肉汤新鲜培养物、生孢梭菌硫乙醇盐液体培养物各lml，分别加入9ml的无菌氯化钠溶液（0.9%）中，10倍系列稀释至使菌数约为50〜100cfu·ml-lo取经25°C培养18〜24h的白色念珠菌改良马丁液体培养物lml,加入9ml的无菌氯化钠溶液（0.9%）中，10倍系列稀释至使菌数约为50〜100cfu·ml-lo取经25'C培养一周的黑曲霉菌斜面培养物，加10ml的无菌氯化钠溶液（0.9%）,将孢子洗脱，后吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（己火菌）过滤，除去菌丝，收集菌液至另一无菌试管内作为菌原液。取此菌原液0.1ml,加入9.9ml无菌氯化钠溶液（0.9%）中，稀释使使菌数约为50〜100cfu·ml-l。上述菌液均进行菌液计数，以两个培养皿的平均数进行计数，见表1。表1细菌和真菌数结果（cfu·ml-l）2.1.2培养基无菌性检查每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，无菌生长。2.1.3培养基灵敏度检查取不含聚山梨酯-80的硫乙醇盐流体培养基和含15%聚山梨酯-80的硫乙醇盐流体培养基各5瓶，分别接种小于lOOcfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、枯草芽胞杆菌、生孢梭菌各一瓶，另一瓶不接种为阴性对照，均置于30〜35°C培养3d。另取不含聚山梨酯-80的改良马丁培养基和含15%聚山梨...