3-actin基因在荒漠昆虫光滑鳖甲与小胸鳖甲中表达稳定性探究摘要：为检测生活习性截然相反的两种荒漠昆虫光滑鳖甲和小胸鳖甲的-actin基因在不同温度下的表达是否稳定，对不同温度处理和不同季节采集的昆虫提取总RNA反转录合成cDNA后，进行荧光实时定量PCR检测。以Ct值作为3-actin基因表达水平的测定值。通过方差分析显示：光滑鳖甲的3-actin基因在不同季节无显著差异，而小胸鳖甲则表现出0-actin基因表达的季节性差异；在不同温度处理条件下，光滑鳖甲3-actin基因表达比小胸鳖甲的要稳定。研究认为-actin可作为研究光滑鳖甲不同温度下基因表达的内参基因，而0-actin则不适合用做研究小胸鳖甲在不同温度下基因表达的内参基因。关键词：0-actin；内参基因；光滑鳖甲；小胸鳖甲;实时定量PCR：S188文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.02.001ExpressionStabilityofB-actinGeneintheDesertInsectsMicroderapunctipennisandAnatolicapolitaMENGShan-shan,MAWen-激ng,LIUXiao-ning,MA激(Xin激angKeyLaboratoryofBiologicalResourcesandGeneticEngineering,CollegeofLifeScieneeandTechnology,Xin激angUniversity，Urumqi，Xin激ang830046,China)Abstract:InordertomeasuringtheexpressionstabilityoftheP-actingeneatdifferenttemperaturesintwodesertinsects,MicroderapunctipennisandAnatolicapolita,whichhavequitecontrarylivinghabit,totalRNAfromtheinsectscollectedindifferentseasons,ortreatedatdifferenttemperatureswasextractedandreversetranscribedtosynthesizecDNAs・TheexpressionoftheP-actingenesfromthesetwospecieswasmeasuredbyCtvalueswhichwereobtainedbyreal-timequantitativePCR.TheresuItsshowedthattherewerenosignificantchangesintheexpressionofB-actingeneinAnatolicapolitaoverseasons,whileinMicroderapunctipennistheexpressionof3-actingenechangedsignifiedritly.Whenthebeetlesweretreatedatdifferenttemperatures,theexpressionof3-actingeneinAnatolicapolitawasmorestablethanthatinMicroderapunctipermis.B-actingeneinAnatolicapolitacouldbeusedasareferencegeneforstudygeneexpressionatdifferenttemperatures,whileitisnotsuitableinMicroderapunctipennisforstudygeneexpressionatdifferenttemperatures・Keywords：B-actin；referencegene；Microderapunctipennis；Anatolicopolito；real-timePCRactin是肌细胞骨架微丝的主要成分，具有收缩功能，参与胞质分裂、形态维持、生长等多种重要的生理活动,是一类高度保守的蛋白质［1］oB-actin具有分布广泛、mRNA表达量高、数量稳定等特点，因此被称为看家基因。传统的RT-PCR及实时荧定量PCR(qRT-PCR)等技术多选用看家基因作为内标来评价目的基因的相对表达量。常用的内标基因有B-actin、18SrRNA.28SrRNA和GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)等，其中P-actin可在多个物种内持续恒量地表达，因而常被用做内参基因［2~3］o例如，粘虫的3-actin基因在6种不同组织间的表达无显著差异［4］。然而，大量研究表明，看家基因所谓的恒定表达都只是在一定类型的细胞或试验因素作用下“有范围”的恒定，在其他类型的细胞中或试验因素作用下则是变化的，有时可能是十几倍、几十倍甚至上百倍的差异，盲目地使用一种看家基因作为内参，一方面可能使基因表达的微小差异难以发现，另一方面可能会导致错误甚至相反的结论［5-6］o通过实时定量PCR证明，actin、RPS18和GAPDH在意大利蜂的细菌胁迫前后表达最稳定，可做为内参基因［7］。GAPDH的表达随牙鲜的变态发育发生波动，3-actin较为稳定，18S是最稳定的［8］。因此，研究目标基因的表达情况时，根据样本的不同，选择合适而稳定的内参基因进行校正和标准化，将有助于得到可靠的试验结果。小胸鳖甲(Microderapunctipennis)和光滑鳖甲(Anatolicapolitaborealis)是两种分布于古尔班通古特沙漠的荒漠拟步甲科昆虫［9-10］o小胸鳖甲成虫避光喜阴，夏季的白天栖居于灌丛的根部，夜晚活动，冬季藏于沙土中；光滑鳖甲成虫喜光耐热，日间活动，早晚温度较低时很...