端粒酶反义寡核苷酸对二甲肼诱导大鼠大肠癌的预防作用【摘要】目的：探讨端粒酶反义寡核苷酸对二甲肼诱导大鼠大肠癌的预防作用。方法：用1，2-二甲肼(1，2-DMH)诱导SD大鼠肠癌发生的模型，观察端粒酶反义寡核苷酸对端粒酶活性及二甲肼诱癌率的影响。结果：本研究使用二甲肼成功地诱导了大鼠大肠癌发生模型，阴性对照组未见肿瘤发生，阳性诱癌组诱癌率为57.69％，反义寡核苷酸保护组诱癌率为26.92％，明显低于阳性诱癌组(P<0.01)；同时反义寡核苷酸保护组端粒酶活性低于阳性诱癌组(P<0.05)。结论：端粒酶反义寡核苷酸在体内能抑制端粒酶活性，对DMH诱导的肠癌有预防作用，可望成为预防和治疗大肠癌的有效药物。关键词：二甲肼；大肠肿瘤；端粒酶反义寡核苷酸；保护作用；大鼠中图分类号：R739.6文献标识码：A文章编号：1000－467X(1999)06－0639－03Preventionofantisenseoligonucleotideoftelomeraseagainstcoloncancerinratsinducedbydimethylhydrazine【Abstract】Objective：Torevealthepossibilityofantisenseoligonucleotideoftelomeraseusedasaneffectiveagentfortumorprevention.Methods：Thecoloncarcinogenesismodelinducedby1,2dimethylhydrazine(1,2-DMH)wasusedtoobservetheeffectofantisenseoligonucleotideoftelomeraseontheinhibitionoftelomeraseactivityandtherateofcoloncarcinagenesisinducedby1,2-DMH.Results：Thecoloncarcinogenesismodelwassuccessfullyestablishedinthisexperiment.Asaresult,thenegativecontrolgroupdeveloptumor.Thecancerinducingrateofpositivecontrolgroupis57.69％,whilethatoftheoligonucleotideprotectinggroupis26.92％.Thedifferencebetweenthetwogroupsisstatisticallysignificant(P<0.01).Theactivityoftelomeraseintheolgonucleotideprotectinggroupislowerthanthatofthepositivegroupstartingfrom10thweekofDMHadministration(P<0.05).Conclusion：Theantisenseoligoncleotideoftelomerasecaninhibittheactivityoftelomeraseandincrealetheprotectionratofinducedcoloncancerinvivo.Itmightbeaneffectiveagentforthepreventionandtreatmentofcoloncancer.Keywords：Coloncancer;Dimethylhydrazine;Antisenseoligonucleotideoftelomerase;Protectiveeffect;Rats肿瘤研究的一个目标是发现对所有癌细胞生长绝对需要而对正常组织细胞不需要的因子，这些因子就可能成为癌症治疗的共同靶子[1]。端粒酶约在90％的人体肿瘤组织中高表达而在正常组织中无活性，这一事实表明端粒酶在肿瘤的发生发展中起着重要作用，是维持肿瘤细胞增殖所必需的[2～4]。那么端粒酶可否成为癌症治疗的共同靶子呢?目前文献报道：以端粒酶为靶点的反义寡核苷酸在体外可抑制永生化细胞的端粒酶的活性及其延长细胞倍增时间，并诱发细胞死亡[5]，在体内可延缓移植性肿瘤的生长[6]。本文以特异性致肠癌物1，2-二甲肼诱导SD大鼠肠癌模型，观察端粒酶模板区的硫代修饰的反义寡核苷酸在诱癌过程中对端粒酶活性的影响及其对诱癌的预防作用。1材料与方法1.1动物与阳性细胞株158只体重为90～110g的SD大鼠，雌雄各半，由广东省医用实验动物中心提供(合格证号为98A033)；人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE2)由中山医科大学肿瘤研究所提供。1.2主要试剂1，2-二甲肼(Dimethylhydrazine，DMH)，购自美国Aldrich公司；3H-dCTP购自NENTMLifeScienceProducts公司(92.5GBq/L,比活性2.0TBq/mmol)；2，5-二苯基恶唑(PPO)和1，4-双(5-苯基-2-恶唑基)苯(POPOP)购自上海化学试剂分装厂；TS引物(5′-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3′)和CX引物(5′-CCCTTACCCTTACCCTTACCCTAA-3′)由加拿大Genda公司合成；硫代修饰的端粒酶反义寡核苷酸(5′-GTTAGGGTTAG-3′)由上海生物所合成。1.3动物分组与处理158只SD大鼠，随机分为3组，A组50只为对照组，按0.5ml/100g体重腹腔注射1mmol/LEDTA，每周一次；B组54只为阳性诱癌组，按25mg/kg体重腹腔注射DMH，每周一次。DMH在临用前用1mmol/LEDTA配成5mg/ml的溶液，并以1mol/LNaHCO3调pH至6.5～7.0[7]；C组54只为反义寡核苷酸保护组，DMH用药同B组，反义寡核苷酸从第...