・80°C条件下不同时间外周血干细胞冻存效果的观察孙淼项军周明先王苇叶金松刘春华（江苏省靖江市人民医院血液科江苏靖江214500）【摘要】目的观察外周血干细胞在・80°C条件下保存时间与细胞活性的关系。方法采用一种简便的・80°C干细胞冻存方法，其干细胞保护剂终浓度为5%二甲基亚飒（DMSO）,3%轻乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS），不经程序降温，直接・80°C冰箱冻存，并调整细胞浓度为（2〜4）107/m1,分别对冻存1、3、6、9、12月干细胞活性进行检测，观察台盼蓝拒染率和MNC、CD34+细胞的回收率。结果干细胞活性在12个月内均无明显下降，其台盼蓝拒染率和MNC、CD34+细胞的回收率都在80%以上。不同时间冻存的干细胞活性比较无明显统计学差异（P>0・05）o结论5%DMSO、3%HES和4%HAS作为干细胞冷冻保护剂肓接在・80°C冰箱冻存外周血干细胞的方法能有效地保护外周血干细胞活性。【关键词】造血干细胞移植外周血干细胞冷冻保存【】R329.2+7【文献标识码】A【】2095-1752（2011）24-0059-02自体造血干细胞移植是治疗恶性血液病的有效手段之一，但细胞冷冻复苏后的活力是移植成功的关键。如能对细胞进行适当有效地冻存，则细胞活力保持完整，损伤较少，移植后造血功能早期得到重建；反之则相对延迟，甚至失败。以5%二甲基亚飒（DMSO）,3%轻乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）作为干细胞冷冻保护剂直接・80°C冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、实用、安全、可靠、成木低的干细胞保存方法，该项技术在干细胞移植中已得到广泛应用。我科对7例外周血干细胞移植的进行了22次外周血干细胞的采集，获取的干细胞均采用上述方法冻存，取得了满意的效果。本文对30份同一细胞浓度在・80°C条件下冻存时间对外周血干细胞的保存效果进行实验观察。1材料与方法1.1一般资料7例患者中男5例，女2例，年龄23〜50岁。非何杰金氏淋巴瘤6例，急性髓细胞性白血病（M2）1例。1.2干细胞动员与采集所有病例均为自体外周血干细胞移植，动员方案为化疗+G・CSF。化疗方案原则上采用对相应肿瘤有效的联合化疗方案并适当调整剂量。于联合化疗后WBC从谷底开始回升时予以G・CSF（5：〜L0mu;g/kg/d,皮下注射），当白细胞〉4.0109/m1,MNO10%时开始采集。血细胞分离机为美国血液公司的MCS+o循环血量为2〜4倍体循环量，采集3〜4次，获得的单个核细胞数范围在（60.3〜93.7）107/m1。1.3外周血干细胞冻存1.3.1冻存保护剂DMSO为上海试剂二厂产品；轻乙基淀粉为德国费森尤斯卡比有限公司牛产；人血白蛋白为河南华兰牛物有限公司产品。1.3.2冻存设施・80°C冰箱为日本三洋公司产品；空气净化工作台为苏州苏净集团产品；冻存袋为美国百特公司产品，容量200ml/袋。1.3.3冻存液5%二甲基亚砚（DMSO）,3%轻乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HAS）[l]o1.3.4冻存方法提取的干细胞以细胞终浓度（2〜4）107/mI[2],小心悬浮于冷冻液中，并加入肝素，分装于低温储存袋中，立即放入・80°C低温冰箱。1.4指标检测分别于1、3、6、9、12个月快速37〜40°C水浴复苏，测其台盼蓝拒染率和MNC、CD34+细胞的回收率[3]。2结果2.1参照推荐干细胞保存细胞终浓度（2-4）107/ml,我科将采集的细胞终浓度控制在上述范围。2.2在不同时间点检测外周血干细胞冻存的效果，结果均以均数plusmn;标准差（x■plusmn;s）表示，t检验求出P值。见表。回收率(%)冻存时间(月)细胞190.47plusmn;3.94388.32plusmn;2.98687.52plusmn;3.14985.78plusmn;3.611288.12plusmn;4.05P>0.05o台盼蓝拒染率（％）MNCCD34+表1〜12个月・80°C冻存效果93.23plusmn;4.2593.11plusmn;5.6291.87plusmn;3.8491.48plusmn;6.0287.91plusmn;4.1488.98plusmn;6.8788.15plusmn;2.6187.65plusmn;7.0482.46plusmn;2.9284.52plusmn;6.11由表中可以看出，随着冻存时间的延长，外周血干细胞的台盼蓝拒染率和MNC、CD34+细胞的回收率呈现逐渐降低趋势，但是与冻存1个月相比无统计学差异。3讨论自体造血干细胞移植（PBSCT）已在多种恶性肿瘤的治疗中获得广泛的应用,外周血干细胞保存是PBSCT成功的关键之一，保存干细胞（HSC）的效率高低直接影响移植成功率。HSC的保存分为非冷冻保存和冷冻保存，前...