无菌原料药生产管理中无菌工艺验证的必要性及方法研究吴桐+高峰+李昊摘要：阐述了无菌原料药生产管理中无菌工艺验证的必要性，并在此基础上，对无菌原料药生产中无菌工艺验证的方法进行了论述，以期为无菌原料药生产质量的提升提供参考和借鉴。关键词：无菌原料药；无菌工艺；微生物；生物技术：TQ460：ADOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2015.19.1041无菌工艺验证的必要性最新版的《GPM实施指南》对无菌的定义为：不存在活的生物和微生物，FDA将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品无菌的相对标准，这一标准在世界各国得到了广泛运用。所谓“无菌药品”，即法定药品标准中列有无菌检查项目的原料药，制造此类药品需要对可能发生的微生物潜在污染进行严格控制，而无菌工艺就是一种尽最大可能减少或消除潜在污染源的生产工艺。为了确保无菌原料药生产过程中采用无菌工艺的可行性，需要通过相应的方法进行工艺验证。这一过程被称为“无菌工艺验证”，即借助已经形成文件的各类证据，证明生产无菌原料的相关条件和设施，比如人员、材料、设备、方法和环境等符合《GPM实施指南》中的规定要求。原料药是各类制剂中的有效成分，是生产制剂时不可或缺的重要组成部分，一般为通过植物提取、生物技术制备或是化学合成的具有药用价值的粉末、结晶等物质。虽然病人无法直接服用原料药，但作为药品的主要成分，其是否符合无菌标准直接关系着药品的质量。因此，在无菌原料药的生产中，必须验证无菌工艺。2无菌工艺验证2.1无菌原料药生产的工艺流程常规的无菌原料药的生产工艺流程如图1所示。2.2无菌工艺验证的有效方法2.2.1验证准备在验证原料药的无菌工艺前，需要做好相应的准确工作，具体包括确认生产设施和生产工艺、清洗设备和灭菌等。其中，生产设施应易于消毒和清洁，从而可有效减少污染源，保证无菌生产的顺利实施，这是无菌工艺验证成功与否的关键要素。通常情况下，一旦产品暴露在空气中，则易导致无菌工艺验证失败。因此，验证前需要对产品进行百级层流罩防护，并尽可能避免工作人员接触生产设备和物料。此外，在正式验证前，必须对接触模拟介质的设备表面进行清洗灭菌处理，还要防止灭菌后再次污染。如果生产的药品具有较强的抗菌性，则该项工作更加重要。如果灭菌不彻底，则极有可能引起模拟介质污染，进而导致验证失败。2.2.2无菌工艺的验证方法无菌工艺的验证方法分为以下2步：①优选模拟介质和灭菌处理。在无菌工艺的验证过程中，模拟介质的选择至关重要。模拟介质应具备的特征包括不存在抑菌作用、有较好的溶解度且不影响培养基的质量、不会对设备造成腐蚀且对人体无害、对环境无污染等。目前，常用的模拟介质主要有PEG4000、乳糖和甘露醇等。选好介质后，应对其进行灭菌处理，因为模拟介质的无菌性会对工艺验证结果造成较大的影响。如果无法确保介质的无菌性，或是在验证前介质受到污染，则会对验证结果的可信性造成影响。因此，在使用模拟介质前，必须进行灭菌处理，可选用的方法为γ射线灭菌。②培养基的选择和灭菌。通常情况下，可根据微生物选择培养基。由于在无菌工艺验证过程中并不清楚系统内微生物的种类，所以，选择多种培养基进行无菌测试的难度较大。因此，可按照实际的生产工艺和环境选择适用于绝大多数微生物的培养基。实践证明，在众多培养基中，大豆酪蛋白消化物的效果较好，这是因为绝大部分无菌原料药的生产都需要与空气接触，感染厌氧菌的概率相对较小，被感染的微生物以需氧菌或真菌为主，因此，可将大豆酪蛋白消化物作为首选培养基。培养基灭菌也可采用γ射线灭菌，同时，要在灭菌处理之后进行生长促进试验。以大豆酪蛋白消化物培养基为例，试验后培养基内应出现较为明显的所接种微生物生长的现象。2.2.3工艺验证的具体过程工艺验证的具体过程分为以下3步：①应对操作规程加以确认，并对相关人员进行培训，从而确保验证中的每一项操作都有标准可依、操作人员熟练掌握有关操作流程。当操作规程确认完毕且人员培训完成后，还应对仪器仪表进行校正，如果仪表不准确，则会导致验证结果出现偏差，因此，必须保证仪表的准确性。仪表校正应由具备资质的单位进行，且校正...