抗凋亡基因Mcl-1在人肝细胞癌组织中的表达及临床意义廖明媚王宁邓星明潘一峰赵劲风(通讯作者)(中南大学湘雅医院肝胆肠外科研究中心410008)【摘要】目的研究抗凋亡基因Mcl-1在人肝细胞癌、癌旁及正常肝组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测51例人肝细胞癌组织、49例癌旁组织和25例正常肝组织中髓样细胞白血病-1(Mcl-1)基因的表达情况,并加以分析。结果Mcl-1在肝细胞癌组织中阳性率为68.63%,与正常肝组织(8.00%)相比，差异有显著性(p<0.01)；Mcl-1表达强度与性别、年龄、HBV感染、肿瘤大小、病理分级和组织分化无相关性(p〉0.05)。结论抗凋亡基因Mcl-1在肝细胞癌组织中过表达，其异常表达与肝癌的发生有关，是肝癌治疗的一个新的细胞因子靶点.【关键词】Mcl-1肝细胞癌基因表达免疫组织化学【中图分类号】R73-3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2012)16-0044-02髓样细胞白血病-l(MyeloidCellLeukelia-1,Mcl-1)基因是Bcl-2基因家族中的一员，也是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)中目前已知的重要抗凋亡因子，该基因广泛表达于人类正常组织中，上皮组织、淋巴组织的生发中心细胞、神经内分泌细胞等均有Mcl-1基因的表达，同样，Mcl-1基因在人类肿瘤组织及肿瘤细胞系中也有表达，且Mcl-1基因定位的人1号染色体长臂在肿瘤性疾病及其癌前病变中有重叠或重排现象，因此研究Mcl-1基因在不同肿瘤组织及细胞系中的异常表达对了解肿瘤发生的可能机制及抗肿瘤治疗的可能途径有重要意义，是未来新的抗癌治疗策略中一个新的靶点［1-2］,也是在临床疾病中一个有效的预后预测指标［3］。1材料和方法1.1病例与标木---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---按照国家肝癌防治协作组制定的肝细胞癌诊断标准，收集中南大学湘雅医院2007年3月至2008年9月病例资料完整的原发性肝细胞癌患者51例手术切除的组织，其中男性47例，女性4例，患者年龄为21-69岁，平均年龄49&plusmn;12岁，其中＜40岁10例(19.61%)，40〜60岁30例(58.82%),〉60岁11例(21.57%)。肝细胞癌病例中合并乙型肝炎者36例(70.59%),合并慢性胆囊炎者27例(52.94%),合并肝硬化者19例(37.25%),巨大肝癌5例(9.80%)o所用组织经甲醛固定，常规组织处理，石蜡包埋，切成3&mu;m厚切片，51例病例中含癌组织51例、癌旁组织49例和正常肝组织25例，所冇切片均做HE染色，肝癌组织学病理分级采用Edmondson-Steiner四级分级法。1.2试剂兔抗人Mcl-1单克隆抗体购自SANTACRUZ公司；免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司，操作按说明书进行；苏木素购自北京中杉公司；DAB显色试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司；其它试剂如二甲苯、乙醇等化学试剂购自国药集团；显微镜购自Lesia。1.3免疫组化SP法SP(streptavidin-perosidase)法即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结'法.步骤如下：烤片&rarr;常规脱蜡&rarr;梯度脱水&nrr;内源性过氧化物酶阻断剂孵育&rarr;正常羊血清工作液封闭&rarr;Mcl-l—抗(1:200)4°C冰箱孵育过夜(用PBS缓冲液代替•一抗作阴性对照)&rarr;生物素标记二抗孵育&rarr;链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶孵育&rarr;避光DAB液染色&rarr;苏木素复染&rarr;l%盐酸酒精分化&rarr;自来水返兰&rarr;常规脱水干燥&rarr;二甲苯透明&rarr;中性树胶封片&nrr;显微镜下阅片并总结染色结果。1.4切片结果评价免疫组化阳性反应为细胞质染色呈黄色或棕黄色。结果采用双人双盲显微---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---镜观察，评分标准采用综合评价法，首先染色强度评分标准：不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，黑黄色为3分；另外，每张切片的癌、癌旁和正常组织各随机计数5个视野500个细胞中阳性细胞所占比例进行评分，评分标准：＜10%为0分，10〜40%为1分，41〜70%为2分，＞70%为3分.两者得分乘积为基因的表达水平，0〜1.0分为（一），1.1〜3.0分为（+），3.1〜6.0分为（++）,〉6.0分为（+++）。由于Mcl-1在正常肝组织中染色阴性或弱阳性，因此定义（一〜+）为阴性表达，（++〜+++）为阳性表达。1.5统计学方法实验数据采用SPSS13.0统计软件进...