中图分类号:S632.5文献标识码：ADOI编码:生姜茎基腐病病原鉴定和生物学特性探究摘要：通过致病性测定、形态特征观察及rDNAITS序列分析，对生姜茎基腐病病原菌进行研究。结果表明：近年来山东生姜上新出现的生姜茎基腐病的病原菌为Pythiummyriotylum,该病原菌生长的温度范围是1~35°C,最适温度25°C,pH值范围5-12,最适pH值为7O关键词：生姜；结群腐霉；形态特征;ITS序列分析；生物学特性10.3969/j.issn.1006—6500.2012.05.007StudyonIdentificationandBiologicalCharacteristicsofthePathogenCausingRhizomeRotDiseaseinGingerSUNXia,FANGTao,QINYan(BiotechnologyInstitute,LaiwuCollegeforVocationalTechnology,Laiwu,Shandong271100,China)Abstract:Thesuspectedpathogenwasstudiedbypathogenicitytest,morphologyidentificationandribosomalDNA—ITSsequenceanalysisinthearticle.TheresultsshowedthatthepathogenofgingerrotdiseaseinShandongwasidentifiedasPythiummyriotylum.Theantemperaturerangeofthepathogenwas4~35°C,thesuitableculturetemperaturewas25°C,andsuitablepHvaluewas7.Keywords:ginger;Pythiummyriotylum;morphologicalidentification;ITSsequenceanalysis;biologicalcharacteristics生姜茎基腐病是近年来山东生姜产区发生的一种新病害，该病从生姜出苗1-2个月开始发生，首先表现为茎基部变黑、腐烂，而地上茎叶仍为绿色，随后老叶变黄萎驀。在盛发期，基部变黑2〜3d后，茎基部完全腐烂，从老姜处齐断，病株死亡，当地人形象地称为“烂脖子”病。据笔者调查,该病从2005年开始陆续在山东莱芜、安丘、莱阳等地发生，并逐渐上升为主要病害，田间病株率在5%-80%之间,严重地块造成绝产。由于该病从出苗后就开始发生，并很快致使姜块腐烂而失去应用价值，给姜民带来了巨大的经济损失，严重挫伤了姜农种植的积极性。目前，国内对生姜茎基腐病病原菌的报道较少，为此，笔者通过对生姜茎基腐病病原菌的分离、纯化，从病原菌的形态学、致病性、生物学和分子生物学方面进行了系统研究，旨在为生姜茎基腐病的预防和防治奠定理论依据。1材料和方法1.1病原菌的分离和培养生姜出苗1-2个月后，从莱芜市郊各姜田采集具有典型症状的病样。采用组织分离法对病斑上的病菌进行分离，在玉米琼脂培养基(CMA)上培养，然后采用单菌丝先端切割的方法进一步纯化、培养。借鉴观察链格鞄(AlternariaNees)sporulationpattern的方法，对抱子囊、卵抱子及藏卵器进行观察，并显微照相［3］。1.2致病性测定采用土埋法［4］进行致病性测定。将完好无病害的生姜种于装有灭菌土的培养钵中，将纯化后的菌株在CMA培养基上培养3d,用直径0.7cm的打孔器打出菌片，取一片接种到植株基部，然后覆盖一层灭菌土。适时浇水，保持一定的土壤湿度，在259培养，以不接菌为对照，记录发病症状。1.3分子生物学方法鉴定1.3.1基因组DNA的提取采用改良CTAB法提取DNA。1.3.2PCR扩增利用真菌核糖体rDNA转录间隔区(ITS)PCR扩增的通用引物ITS1(5'—TCCGTAGGTGAACCTGCGC—3')和ITS4(5'—TCCTCCGCTTTTGATATGC—3J对提取的真菌总DNA进行PCR扩增。50pLPCR反应体系包括：10>