纤溶酶注射液对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及机制研究孟凡彩李海静赵振莹【摘要】目的探讨纤溶酶注射液（FI）对链脲佐菌素（STZ）诱导的大鼠糖尿病肾病（DN）的治疗作用及机制。方法40只SD大鼠，随机分成正常对照组（NC组，10只）和研究组（30只）。研究组采用STZ注射诱导大鼠模型成功20只，随机分为DN组和DN+FI组，各10只。DN+FI组大鼠用FI每日尾静脉注射，对DN组大鼠进行连续8周治疗。每日观察各组大鼠的一般状况，计算肾脏脏器系数，光镜检查肾组织形态改变，生化法检测尿蛋白（UP）量、血清超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性，蛋白质印迹法检测肾皮质组织中纤溶酶原活化抑制因子-1（PAI-1）蛋白的表达量。结果经FI治疗后，DN组大鼠的一般状况逐渐接近正常，肾脏脏器系数降低，UP量减少，肾组织病理变化明显改善，与NC组比较，DN组大鼠血清的SOD、CAT活性明显降低，UP含量明显增加，差异具有统计学意义（P【关键词】纤溶酶注射液；糖尿病肾病；大鼠；超氧化物歧化酶；过氧化氢酶；纤溶酶原活化抑制因子-1DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.20.107糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）是糖尿病（diabe?tesmellitus，DM）最主要的微血管并发症，也是导致慢性肾衰竭的主要原因之一。DM病程10年以上者約50%并发DN。每年新增终末肾病中，DN所占比例逐年升高[1]。DN早期的主要病理特征是肾小球肥大，肾小球和肾小管基底膜增厚、系膜区细胞外基质的进行性积聚以及微血栓的形成。后期为肾小球、肾小管间质的纤维化，最终导致蛋白尿和肾功能衰竭。氧化应激是导致DM慢性并发症的最根本原因之一[2]。由于DN患者体内糖代谢紊乱，持续清除活性氧簇（reactiveoxygenspecies，ROS）的抗氧化酶如超氧化物歧化酶（superoxidedismutas，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）等含量明显降低，导致氧化应激水平增高，最终损伤肾组织[3]。凝血和纤溶系统的紊乱也是DN发生的一种重要机制。DN患者体内血液普遍存在的高凝状态和血管病变与纤溶酶原活化抑制因子-1（plasminogenactivatorinhibitor-1，PAI-1）的高表达高度相关[4]，这提示PAI-1的表达增多在DN发生中发挥重要作用。对DN患者进行早期干预治疗具有重要的临床意义。改善肾微循环是对DN患者早期干预治疗的一个重要方面[5]。纤溶酶注射液（fibrinogenaseinjection，FI）内含纤维蛋白溶解酶，能够降低血小板聚集及血液粘度，改善微循环。纤溶酶注射液常用于治疗心血管疾病如动脉硬化性脑病、脑梗死、下肢深静脉血栓等具有较好的疗效[6]。然而，FI用于早期干预治疗DN还未有报导。鉴于此，本文诱导了DN大鼠来研究FI对DN大鼠的治疗效果，并探讨可能的机制。1材料与方法1.1实验动物选取清洁级雄性SD大鼠40只，8周龄，体重180～220g，购自临沂市实验动物中心。动物单笼饲养，自由摄食、饮水，饲养室温度保持在（22±2）℃，自然光照，适应3d后用于实验。随机分成正常对照组（NC组，10只）和研究组（30只）。1.2试剂链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）、SOD、CAT检测试剂盒均购自Sigma公司（St.Louis，MO，USA）；尿蛋白（urineprotein，UP）考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒购自上海索莱宝生物科技有限公司；FI购自北京赛升药业股份有限公司；PAI-1小鼠单克隆抗体（C-9）、兔抗鼠IgG-HRP单克隆抗体均购自SantaCruz公司（SantaCruz，CA，USA）。1.3试验方法研究组大鼠禁食12h后一次性腹腔注射STZ50mg/kg（溶于0.1mol/L，pH=4.2的无菌枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液中，终浓度为1%，现配现用），注射72h后连续3d大鼠尾静脉采血检测血糖。以连续3次血糖浓度>16.7mmol/L，尿量>原尿量150%，UP排泄>30mg/24h尿者为成模标准。最终，建模成功的大鼠20只，成功率67%。NC组大鼠给予等量缓冲液注射。研究组大鼠随机分为DN组和DN+FI组，各10只。1.4动物给药及样品收集DN+FI组大鼠采用尾静脉注射2U/kg的FI（溶于生理盐水，1U/ml），连续给药8周，NC组和DN组给予等量的生理盐水。各组实验大鼠于8周后处死，处死前1d代谢笼收集24h尿液，记录尿量，麻醉后，称重、颈动脉取血，分离血清。尿液、血清置于﹣80℃冰箱保存，用于检测生化指标。同时分离肾脏，用滤纸吸干...