ICS65.020B61DB37山东省地方标准DB37/T××××—××××草莓苗木繁育技术规程Technicalregulotionsofseedlingsbreedingforstrawberry××××-××-××发布××××-××-××实施山东省市场监督管理局发布前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省农业农村厅提出并组织实施。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东农业工程学院、龙口市农业局、济南普朗特生物科技有限公司。本标准主要起草人：秦旭、范崇慧、崔刚、王猛、刘文宝、段曦、束靖、徐波、鲁萌。草莓苗木繁育技术规程1范围本标准规定了草莓苗木繁育的品种与植株选择、脱毒苗繁育、生产用苗繁育和生产档案等。本标准适用于山东省内草莓苗木繁育。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则NY/T496肥料合理使用准则通则NY/T1276农药安全使用规范总则NY/T5010无公害农产品种植业产地环境条件NY/T5105无公害食品草莓生产技术规程3品种与植株选择3.1品种选择选择抗性强、品质优良草莓品种。促成栽培选择休眠短的品种。3.2植株选择选择健康草莓植株，种苗质量标准为有三片以上新叶，根须发达，无病虫害。4脱毒苗繁育4.1繁育流程包括培养室培养和温室驯化移栽两个阶段。4.2培养室培养4.2.1培养室设置4.2.1.1配药室配备冰箱、实验台、天平、恒温培养箱、加热器、pH计、蒸馏水制备器、三角瓶、培养皿、量筒、烧杯、容量瓶等仪器设备。4.2.1.2洗涤室配备洗瓶池、洗瓶机、纯水发生器等。4.2.1.3灭菌室配备高压灭菌锅等设备。4.2.1.4更衣室用于操作人员更衣，放置无菌操作服。4.2.1.5冷凝室用于存储培养基。4.2.1.6接种室用于操作人员接种操作，放置超净工作台、双目显微镜、臭氧发生器等灭菌仪器、镊子、剪刀、接种刀设备。4.2.1.7培养室用于组培苗培养，放置多层培养架，室内保持在20℃～25℃，空气相对湿度保持在50%～60%，采用日光灯、LED灯等补充光照，培养室内每日光照12h～14h，光照强度2000lx～3000lx。4.2.2热处理将选好草莓植株放入39℃±1℃恒温培养箱或人工气候箱内进行培养，光照模拟自然光，待长出匍匐茎作为外植体。4.2.3茎尖诱导培养4.2.3.1外植体清洗洗涤剂清洗2min～3min，再用吐温清洗2min～3min，清洗过程中不停摇晃，以便清洗充分；清洗过后用流水冲洗30min～40min。4.2.3.2外植体消毒在超净工作台上将外植体置于无菌瓶中；用75%酒精浸泡30s，过程中不断摇晃，消毒均匀彻底；无菌水冲洗4～5遍；用1‰的HgCL浸泡3min，过程中不断摇晃，消毒均匀彻底；无菌水冲洗4～5遍。4.2.3.3培养基制作基本培养基为MS培养基。将加热溶化的培养基分装在100ml三角瓶或其它培养容器中，在121℃高压灭菌20分钟。茎尖分化培养基和增殖继代培养基添加6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.2mg·L-1～0.5mg·L-1，赤霉素（GA3）0.1mg·L-1～0.5mg·L-1，吲哚丁酸（IBA）0～0.02mg·L-1；生根培养基附加6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.1mg·L-1～0.2mg·L-1，吲哚丁酸（IBA）0.02mg·L-1～0.1mg·L-1。4.2.3.4茎尖剥离在双目解剖镜下，用解剖针将0.3mm～0.5mm的生长点完整取下，然后将其接入配制好的培养基内培养。4.2.3.5茎尖培养接种后的玻璃瓶放在培养室中培养。环境条件同培养室要求。培养大约2个月，草莓茎尖可长成完整植株，此后进行增殖继代培养。4.2.4病毒检测组培苗要进行病毒检测，每个组培无性系抽取1%的样品进行草莓斑驳病毒（SMoV）、草莓轻型黄边病毒（SMYEV）、草莓镶脉病毒（SVBV）及草莓皱缩病毒（SCrV）检测，检测采用酶联免疫法（ELISA）、PCR、分子标记法进行。检测无病毒后继续增殖继代培养。4.2.5增殖继代培养培养基为MS培养基+6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）0.05mg/L+吲哚丁酸（IBA）0.01mg/L+糖25g/L。在超净工作台上用镊子、剪刀将其分隔成3～4株在一起的小芽丛，再放入新培养基瓶中培养，每瓶3～4个芽丛，每代周期大约30d～40d，最好不超过两代，继代培养时间不应超过1年。4.2.6生根培养培养基为1/2MS培养...